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背景与目的:肿瘤血管新生离不开内皮细胞的激活、增殖及迁移。肿瘤组织新生血管内皮细胞与正常组织血管内皮细胞存在差异,但长期以来由于肿瘤源性微血管内皮细胞(tumor- derived microvascular endothelial cell, TdMEC)较难分离培养,体外研究肿瘤血管新生多应用正常组织来源的内皮细胞。因此,分离和培养TdMEC在研究肿瘤血管生成机制及抗血管生成治疗方面具有重要意义。血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor, PDGF)是由多种细胞产生的肽类生长因子,它在组织修复、胚胎发育、免疫以及多种常见疾病中起着重要作用。它在体外对内皮细胞具有趋化活性并能促进内皮细胞有丝分裂,在体内能促进新生血管形成。卵巢癌中存在显著的血管生成现象,是研究肿瘤血管生成的良好材料。本实验在分离纯化人卵巢癌微血管内皮细胞(ovarian carcinoma-derived microvascular endothelial cell, OdMEC)并观察其生物学特性的基础上,以人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)为对照,通过观察PDGF-BB对OdMEC生长、PCNA和VEGF表达的影响,初步探讨OdMEC与正常血管内皮细胞的生物学特性及对血管生成因子刺激反应性的差异,为研究卵巢癌血管生成机制和抗血管生成提供实验基础。方法:取卵巢癌手术标本,采用胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、dNaseⅠ联合消化法及Percoll密度梯度离心沉降法分离培养人卵巢癌微血管内皮细胞。应用光镜、透射电镜和免疫细胞化学等技术对获得的细胞进行了鉴定。采用四甲基偶氮噻唑蓝法(MTT)测定细胞生长曲线,观察其生物学特性。在此基础上,用PDGF-BB干预OdMEC和HUVEC,利用免疫细胞化学和RT-PCR技术观察刺激后细胞增殖、PCNA及VEGF表达的变化。结果:1.采用酶联合消化法及Percoll密度梯度离心沉降法分离获得纯度较高(细胞纯度> 85%)、可传代的OdMEC。OdMEC的生长曲线显示其滞留期较长,约3~4天,第4~7天为增殖高峰期。2. OdMEC呈单层生长,互不重叠,呈现典型的“铺路石样”外观;透射电镜观察到内