论文部分内容阅读
大豆皂苷(Soyasaponin)主要分布于大豆等豆科植物中,属于结构复杂的五环三萜类齐墩果烷型皂苷。大豆皂苷具有多种生理活性,在医药、保健品等领域的应用具有重要意义和广阔前景。大豆皂苷种类较多,其中大豆皂苷Ab是大豆皂苷复合物提纯和分离后所得的主要皂苷单体。目前对于大豆皂苷的生物活性研究多集中在大豆皂苷复合物上,对于其单体的研究报道较少。本文采用从大豆胚芽粉中提纯得到的大豆皂苷Ab为研究对象,通过体外实验研究了大豆皂苷对细胞的毒性作用、免疫刺激活性并初步探讨了相关分子信号机制。溶血性实验结果表明,与皂树皮皂苷相比,大豆皂苷Ab的溶血性极弱。大豆皂苷Ab浓度在10 mg/mL以内几乎无溶血性,当大豆皂苷Ab浓度达到20 mg/mL时溶血率仅约为7%,而对照组的皂树皮皂苷在20μg/mL时已经使红细胞完全溶血。此外,MTT实验结果表明,大豆皂苷Ab对RAW264.7细胞几乎没有毒性。在大豆皂苷Ab浓度为1~20μg/mL时,RAW264.7细胞存活率接近100%;而皂树皮皂苷在浓度为5μg/mL时,相应的细胞存活率仅50%左右,当皂树皮皂苷浓度增加至20μg/mL时,细胞存活率仅为6%左右。以上结果表明,大豆皂苷Ab的体外细胞毒性极低。ELISA实验结果表明,大豆皂苷Ab(0~200μg/mL)促进RAW264.7细胞释放细胞因子TNF-α和IL-1β,并且释放水平随大豆皂苷Ab浓度的增大而提高;双荧光素酶实验结果表明,大豆皂苷Ab可激活NF-κB转录因子。这些结果表明,大豆皂苷具有一定的免疫刺激活性。Western blot实验结果表明,将特异性沉默TLR4表达的siRNA转染RAW264.7细胞后,有效抑制了TLR4的表达,其抑制效率大于60%,并且转染了TLR4 siRNA组细胞在用大豆皂苷Ab作用后所释放的TNF-α、IL-1β水平显著低于未转染TLR4 siRNA组,NF-κB信号分子的活性也显著低于未转染siRNA2对照组。这些结果显示,TLR4可能在大豆皂苷Ab引起的RAW264.7细胞释放细胞因子TNF-α和IL-1β及NF-κB信号转导通路过程中发挥了重要功能。