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背景和目的：肝肺综合征(hepatopulmonary syndrome，HPS)主要发生在包括肝硬化在内的终末期肝病患者中，其发生率超过15%，而死亡率逐年增加，因此对于HPS的研究逐渐成为一个热点。肝源性细胞因子，导致肺内微血管扩张(intraplmonary vasodilatation,IPVD)，最终导致PASMCs的异常增殖，进一步加重肺血管重建(pulmonary vascularremodelling，PVR)。因此，PASMCs的异常增殖是HPS相关PVR最主要的病理变化。我们前期的研究发现，HPS大鼠血清及3%浓度氧气等可以诱导PASMCs异常增殖；同时，PASMCs发生表型转化及其骨架蛋白也发生表达变化。既往研究发现，在一些疾病(如肺动脉高压)的病理进程中，PASMCs异常增殖的同时，伴随着PASMCs的表型转化和骨架重排；PASMCs的表型转化及其骨架蛋白的表达变化是PASMCs发生异常增殖的上游途径。寻找骨架蛋白变化和细胞增殖的关系，有利于进一步解释HPS的分子机制。桩蛋白(Paxillin)是一种磷酸化蛋白，既往研究发现，其在多种细胞内表达，参与多种细胞的生物学功能调节，在细胞骨架蛋白的表达与重排中起重要调控作用。既往研究发现，膜联蛋白A1(annexin A1，ANXA1)可能和Paxillin具有相互作用，其可能影响Paxillin的表达，对Paxillin的研究是在前期研究上的深入，具有重要意义。基于上述依据，我们推测：在HPS相关的PASMCs异常增殖中，首先出现细胞骨架蛋白的表达变化和骨架重排以及细胞表型转化，进而导致PASMCs的异常增殖；Paxillin可能在细胞骨架蛋白的表达调节中起重要作用，并最终影响PASMCs的增殖。本研究拟通过胆总管结扎(common bile duct ligation，CBDL)构建HPS大鼠模型，原代培养PASMCs，利用CCK-8、3H-TdR、RT-PCR及Western-blot等方法检测PASMCs的增殖情况和其中Paxillin及骨架蛋白的表达情况；通过siRNA干扰技术对Paxillin进行干预，探讨其中的分子机制；最终揭示Paxillin在HPS相关PASMCs异常增殖中的分子机制，为HPS的预防和诊治提供更好的措施。方法：实验分为两部分：(1)HPS大鼠血清培养的PASMCs中Paxillin及骨架蛋白表达的变化1)构建HPS大鼠模型及血清制备2)大鼠PASMCs的分离、培养和鉴定3)RT-PCR及Western-blot法检测Paxillin的表达变化4) Western-blot法检测骨架蛋白(α-actin，α-tubulin，destrin)的表达变化(2)下调Paxillin的表达对HPS大鼠血清培养的PASMCs中骨架蛋白表达及其增殖的影响1) siRNA下调PASMCs中Paxillin的表达2)下调Paxillin表达后对HPS血清培养的PASMCs异常增殖及骨架蛋白表达的影响结果：(1)HPS大鼠血清可以诱导Paxillin的转录和蛋白表达水平明显上调，这一上调呈时间相关性。(2)HPS大鼠血清刺激下PASMCs中骨架蛋白(α-actin，destrin，α-tubulin)表达呈时间相关性下调。(3)利用特异性的Paxillin siRNA可以有效抑制Paxillin的蛋白表达。(4)抑制Paxillin的表达后，HPS大鼠血清培养的PASMCs中骨架蛋白表达下调被抑制，PASMCs的异常增殖明显受抑。结论：通过以上结果总结，在HPS相关的PASMCs异常增殖中，细胞骨架蛋白的表达变化可能是其异常增殖的前提；而在此过程中，Paxillin作为一个关键的调节靶点，其可能通过影响细胞骨架的表达变化调节PASMCs的增殖，即：Paxillin在HPS相关PASMCs增殖中具有重要调控作用。