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目的:血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)又名血管通透因子(Vascular permeability factor,VPF),主要由角质形成细胞(keratinocyte,KC)产生,是目前发现的作用最强、特异性最高的促血管生成因子,具有血管生成、增加血管通透性的活性,对血管内皮细胞具有特异性。VEGF主要有VEGF121、VEGF145、VEGF148、VEGF165、VEGF165b、VEGF183、VEGF189、VEGF206,8种亚型。正常成人皮肤组织中VEGF有维持真皮原有微血管密度和维持血管运输营养物质所需通透性等自身稳定方面的生理学作用。许多炎症性皮肤病有共同的病理特征:真皮乳头层微血管增生、扩张且管壁增厚。有日本学者研究发现,异位性皮炎的皮损中,血管内皮生长因子的水平较非皮损区及健康人的皮肤明显增高,亚型分析显示,主要是VEGF 121和VEGF 165,因此考虑VEGF 121和VEGF 165和异位性皮炎的发病有关,但作用机制不明。本实验旨在研究不同亚型血管内皮生长因子(VEGF)是通过激活何种生物信号转导途径而引起生物学效应,进一步阐明血管内皮生长因子与异位性皮炎的发生发展的关系,为异位性皮炎的临床预防和治疗的新靶点提供理论依据,也为最终阐明异位性皮炎等多种疾病的发生和发展的分子机制奠定基础。方法:1体外培养人类脐静脉血管内皮细胞。2 VEGF165或VEGF121对血管内皮细胞分别刺激,不同时间后对细胞进行回收。3采用蛋白印迹Western Blot方法对血管内皮细胞中的FAK信号转导通路中的FAK和磷酸化FAK的相对定量检测,分析其磷酸化FAK阳性表达变化。4同样采用蛋白印迹Western Blot方法,对Akt信号转导通路中Akt和磷酸化Akt进行检测,分析磷酸化的Akt阳性表达及其变化。5运用统计软件SPSS13.0对数据进行统计学分析。结果:1 VEGF121及VEGF165促人脐静脉内皮细胞FAK磷酸化的能力分析1.1VEGF121促人脐静脉内皮细胞FAK磷酸化能力的分析经VEGF121刺激的血管内皮细胞,磷酸化FAK占总FAK的百分比在刺激30分钟内变化有时间依赖性,随时间变化迅速升高,5分钟时为0.893±0.048,30分钟时达峰值1.192±0.151,60分钟时水平已下降为0.966±0.069,不同刺激时相之间磷酸化FAK的百分比之间存显著差异, P<0.05。1.2VEGF165促人脐静脉内皮细胞FAK磷酸化能力的分析经VEGF165刺激的血管内皮细胞,磷酸化FAK占总FAK的百分比在刺激10分钟内变化有时间依赖性,随时间变化逐渐升高,5分钟时为0.469±0.042,10分钟时达峰值1.015±0.120,不同刺激时相之间磷酸化FAK的百分比之间存显著差异, P<0.05。1.3VEGF121和VEGF165促人脐静脉内皮细胞FAK磷酸化能力的比较分析VEGF121与VEGF165相比,磷酸化FAK百分比的变化趋势在统计学上存在显著差异(P<0.05),经VEGF121刺激的血管内皮细胞FAK迅速磷酸化,且磷酸化FAK的含量较高。2 VEGF121及VEGF165促人脐静脉内皮细胞Akt磷酸化的能力分析2.1 VEGF121促人脐静脉内皮细胞Akt磷酸化能力的分析经VEGF121刺激的血管内皮细胞,磷酸化Akt占总Akt的百分比随时间变化明显改变,经统计学分析不同刺激时相之间磷酸化Akt的百分比有显著差异,P<0.05。2.2 VEGF165促人脐静脉内皮细胞Akt磷酸化能力的分析经VEGF165刺激的血管内皮细胞,磷酸化Akt占总Akt的百分比随时间变化明显改变,经统计学分析不同刺激时相之间磷酸化Akt的百分比有显著差异,P<0.05。2.3VEGF121和VEGF165促人脐静脉内皮细胞Akt磷酸化能力的比较分析VEGF121与VEGF165相比,磷酸化Akt百分比的变化趋势在统计学上无显著差异(P>0.05)。(以上结论满足协方差矩阵对称条件,P>0.05)结论:1 VEGF 121和VEGF 165均能激活FAK信号传导通路,但是VEGF 121较VEGF165的作用明显且迅速;2 VEGF 121和VEGF 165均能激活Akt信号传导通路,但两者就该能力而言无显著差异;3结合以往研究得出:VEGF 121之所以较VEGF165易引起血管通透性增加,很可能是其通过优势促进FAK及Src信号通路蛋白的磷酸化而实现的。