【摘 要】
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本课题通过厌氧技术从奶酪中分离出4株菌。用液氮研磨法提取其基因组DNA,通过通用引物1492r和27f扩增其16SrDNA,并对扩增片段进行测序,通过序列比对,两株菌确定为是费氏丙酸
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本课题通过厌氧技术从奶酪中分离出4株菌。用液氮研磨法提取其基因组DNA,通过通用引物1492r和27f扩增其16SrDNA,并对扩增片段进行测序,通过序列比对,两株菌确定为是费氏丙酸杆菌谢氏亚种,另两株菌为费氏丙酸杆菌费氏亚种。接下实验以费氏丙酸杆菌费氏亚种为实验菌构建基因敲除体系。用上述分离出来的菌株作为实验菌株,用PCR扩增了hemE基因上、下游约500bp左右片段,构建了由上下游同源臂及hygB抗性基因组成的打靶质粒pPK705-arms-hygB。将打靶质粒导入丙酸杆菌感受态细胞,传代培养。最后,通过PCR验证了打靶质粒与丙酸杆菌基因组发生了同源重组。本实验赋予丙酸杆菌新的技能,对稳定地改善其整个代谢途径的研究奠定了方法学基础。
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