日益严重的环境污染与人口老龄化问题使得我国皮肤癌发病率逐年上升,通常认为皮肤癌的发生与日积月累的接触有毒物质或紫外线照射有关。现代医学对皮肤癌治疗以手术切除、放化疗干预为主,但复发率较高,且治疗副作用多、费用较高。皮肤癌在中医中属于“反花疮”、“恶疮”等,也是癥瘕积聚的一种,中医药按疮疡论治。气血凝滞、郁而化火、火毒伤肌是疮疡发病的共同点,赤小豆当归散载于《金匮要略》,具清热利湿,解毒排脓,去瘀生新的功效,与中医疮疡治疗病机相符,本文的目的是观察赤小豆当归散对皮肤癌的防治作用。本研究分体内、体外及机制研究三部分。体外研究中,使用不同浓度的赤小豆当归散醇提物处理A431、B16-f10细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响;激光全息检测赤小豆当归散醇提物对细胞形态、体积的影响;划痕实验检测赤小豆当归散醇提物对细胞迁移能力的影响。体内研究中,首先采用二甲基苯蒽诱导小鼠皮肤癌模型,建模同时小鼠灌胃给药赤小豆当归散,记录实验小鼠背部肿瘤发生率及肿瘤结节数变化;HE染色观察小鼠背部皮肤组织与肝组织病理变化;免疫组化检测小鼠背部皮肤组织EMT相关蛋白表达。继而采用黑色素瘤同种异体移植模型,肿瘤接种同时小鼠灌胃给药当归赤小豆散,记录荷瘤小鼠瘤体积变化;免疫组化检测荷瘤鼠肿瘤组织EMT相关蛋白表达。机制研究中,首先运用网络药理学预测赤小豆当归散防治皮肤癌作用的分子机制,将机制锁定在细胞呼吸、凋亡、免疫清除和细胞增殖上。体外,AO染色检测赤小豆当归散对A431、B16-f10细胞自噬的影响;ROS试剂盒、线粒体膜电位试剂盒检测赤小豆当归散对A431、B16-f10细胞ROS、线粒体功能的影响;免疫荧光检测赤小豆当归散对A431、B16-f10细胞Ras、Bcl-2表达的影响。体内,二甲基苯蒽诱导皮肤癌模型中,ROS试剂盒、线粒体膜电位试剂盒检测背部皮肤组织的ROS、线粒体功能;免疫组化检测背部皮肤组织CD8、PD-1、TGF-β1、VEGF表达;免疫荧光检测皮肤组织CD4、Caspas3、P16、Ras、Bcl-2表达;Western blot检测皮肤组织Jak-2、Akt、Stata3、AMPKα1表达。在黑色素瘤同种异体移植模型中,ROS试剂盒、线粒体膜电位试剂盒检测瘤组织ROS、线粒体功能;免疫组化检测瘤组织TGF-β1、PD-1、CD8、VEGF表达;免疫荧光检测瘤组织CD4、Caspas3、P16、Ras、Bcl-2表达;Western blot检测瘤组织Jak-2、Akt、Ctata3、AMPKα1表达。体外结果显示,赤小豆当归散醇提物在一定浓度下能改变A431细胞、B16-f10细胞形态,赤小豆当归散能降低细胞增殖能力和迁移能力。体内结果显示,在二甲基苯蒽诱导小鼠皮肤癌模型中,赤小豆当归散能降低小鼠背部皮肤肿瘤发生率及明显减少肿瘤结节数,改善造模过程中致癌剂产生的皮肤损伤和肝脏损伤;免疫组化结果显示赤小豆当归散可阻止小鼠背部皮肤肿瘤的EMT进程。在黑色素瘤同种异体移植模型中,赤小豆当归散也能减缓黑色素瘤生长速度,减慢瘤组织EMT进程。机制研究中,网络药理学分析指示赤小豆当归散能通过调节细胞呼吸、凋亡、免疫清除和细胞增殖等生物过程,以及调节AMPK通路、PI3K-Akt等信号通路防治皮肤癌。体外,赤小豆当归散能改善A431、B16-f10细胞线粒体功能,降低细胞ROS水平,促进细胞自噬,降低Ras和Bcl-2表达。在二甲基苯蒽诱导小鼠皮肤癌模型中,赤小豆当归散能降低背部皮肤组织ROS水平,改善线粒体功能,降低皮肤组织中TGF-β1、Collagen-1、VEGF、PD-1、Ras、Bcl-2、Jak-2、Akt、Stata3、AMPKα1表达,增加CD8、CD4、Caspas3、P16表达,维持皮肤组织稳态。黑色素瘤同种异体移植模型中,赤小豆当归散能降低肿瘤组织ROS水平,改善线粒体功能,降低TGF-β、PD-1、VEGF、Ras、Bcl-2、Jak-2、Akt、Stata3、AMPKα1表达,增加CD8、CD4、Caspas3、P16表达,降低癌细胞恶性。综上所述,赤小豆当归散能通过改变癌细胞形态、促进细胞自噬、抑制细胞增殖与迁移等降低细胞恶性祛除毒源,同时通过调节细胞线粒体功能、调节细胞信号传导和机体免疫等增加机体排异能力,维持皮肤细胞稳态,从而防治皮肤癌。