【摘 要】
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目的确定CpG寡核苷酸(CpG oligonucleotide,CpG ODN)作为可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)的最佳剂量,观察最佳剂量的CpG ODN和STAg鼻内免疫小鼠所诱导的
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目的确定CpG寡核苷酸(CpG oligonucleotide,CpG ODN)作为可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)的最佳剂量,观察最佳剂量的CpG ODN和STAg鼻内免疫小鼠所诱导的免疫应答的持续时间,以及CpG ODN和霍乱毒素(cholera toxin,CT)联合佐剂的协同作用,弓形虫复合黏膜疫苗研制提供理论和实验依据。方法第一部分:5～6周龄BALB/c小鼠50只随机分为5组,每组10只,实验组以0、1、5、10μg的CpG ODN联合20μg STAg滴鼻免疫小鼠,对照组以PBS滴鼻,间隔2周免疫2次。末次免疫后30d处死全部小鼠,观察脾、Peyer’s patch(PP)、肠系膜淋巴结(MLN)和IEL淋巴细胞增殖情况。检测血清IgG和粪便IgA含量。第二部分:雌性BALB/c小鼠72只随机分为实验组和对照组,每组36只。实验组以10μg CpG ODN联合20μg STAg滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻。间隔2周免疫2次,于末次免疫后第1、2、3、4、5、6周分别随机处死小鼠(6只/组)。测定小肠冲洗液、鼻咽冲洗液、肺冲洗液、阴道冲洗液IgA和血清IgG。分离脾和IEL进行淋巴细胞计数。第三部分:5～6周龄BALB/c小鼠30只,雌雄各半,随机分为4个实验组和PBS对照组。实验组分别用20μg STAg、20μg STAg+10μg CpG ODN、20μg STAg+ 1μgCT、20μg STAg+ 1μgCT +10μg CpG ODN滴鼻免疫,间隔2周免疫2次。对照组用PBS以相同程序免疫。末次免疫后第20d处死小鼠。收集血清和肠冲洗液,用ELISA法检测血清弓形虫特异性IgG和肠液IgA含量。分离脾淋巴细胞,用MTT法检测淋巴细胞增殖活性。结果不同剂量的CpG ODN联合STAg滴鼻免疫小鼠后,10μg CpG ODN组小鼠肠相关淋巴组织PP、MLN和IEL以及脾淋巴细胞增殖明显(P<0.05)。10μg组血清IgG远高于对照组(P<0.05),粪便IgA高于对照组(P>0.05)。10μg CpG ODN联合STAg滴鼻免疫小鼠后脾淋巴细胞和IEL增生明显。脾淋巴细胞在第2、3、4、5周显著高于对照组(P< 0.001)。IEL数量分别在第2、4周出现两个峰值,第2、3、4周显著高于对照组(P< 0.001)。实验组小鼠各冲洗液中IgA平均水平高于对照组。小肠冲洗液中弓形虫特异性IgA抗体水平在各个时间点均高于对照组。与对照组相比,第2、3周(P< 0.001),4周(P< 0.05)有显著差异。鼻咽冲洗液中IgA水平在第1周时最高,各时间点虽高于对照组,
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