樟树广泛分布于我国长江以南地区,如湖南、江西、福建等,为热带和亚热带常绿阔叶林的代表树种,属四季常青的樟科属。樟树中主要化学成分有挥发性油、生物碱类、黄酮类、木脂素、有机酸和留醇类。其中,木脂素因具有较好的抗氧化、抗肿瘤、调节血浆胆固醇、保护肝脏、抗炎、抗病毒、抗菌等生物功效,成为近年来研究热点之一。为了进一步综合开发利用樟树资源,本文针对樟树叶中木脂素的提取纯化工艺和体外抗肿瘤作用进行了以下研究,其主要结果如下:1.以樟树叶为原料,五味子酯甲为对照品,采用变色酸显色法测定樟树叶中木脂素含量。在单因素试验的基础上,以乙醇浓度、液料比、回流次数、提取温度为响应因子,樟树叶中木脂素提取率为响应值,采用Box-Behnken中心组合设计进行四因素三水平的响应面分析,以优化木脂素热回流提取工艺。结果表明,最优提取工艺参数为:乙醇浓度87%、液料比11:1 mL/g、回流3次、提取温度70℃,木脂素实际提取率为43.39 mg/g(樟叶粉质量为5.0 g)。2.大孔树脂纯化樟树叶醇提液中木脂素类化合物研究:以樟树叶中木脂素的吸附率与解吸率为指标,通过比较D101、AB-8、X-5、NKA-9、HPD722及HPD600大孔树脂的吸附-解吸效果,筛选出AB-8大孔树脂作为纯化材料,研究了上样浓度、上样流速、上样体积对AB-8大孔树脂吸附性能的影响以及洗脱剂浓度、洗脱流速、洗脱剂用量对大孔树脂解吸性能的影响,并通过正交实验优化木脂素纯化工艺。结果表明,AB-8大孔树脂对樟树叶中木脂素吸附-解吸最佳工艺条件为:上样量为7 BV,浓度为2.12 mg/mL,以1.0 mL/min的速率进行动态吸附;待吸附饱和后,用8 BV的80%乙醇以2 BV/h流速进行解吸,收集解吸液经浓缩、干燥测得木脂素得率为66.68%,与纯化前得率(22.34%)相比,显著提高(p<0.05)。在此基础上,对木脂素进一步分离纯化,并经紫外光谱仪、高效液相色谱-质谱仪以及高效液相仪分析、鉴定,得到纯度为90.13%的芝麻素。3.体外培养人肝癌HepG2细胞,并将不同浓度的樟树芝麻素(40、60、80、100、120 μg/mL)与人肝癌HepG2细胞共同培养,测定不同浓度芝麻素对人肝癌HepG2细胞活性、细胞形态、细胞迁移能力、细胞核凋亡形态以及细胞凋亡率的影响。结果表明,芝麻素浓度在40～120 μg/mL范围内对人肝癌HepG2细胞生长有明显抑制作用(P<0.01),呈剂量、时间相关性,且对HepG2细胞的半抑制浓度(IC50)为100 μg/mL;显微镜观察发现细胞形态呈现皱缩、变圆,细胞间连接疏松,贴壁能力下降;划痕实验结果表明:40、80 μg/mL芝麻素处理48 h后,细胞迁移率分别为34.26±4.57%、25.25±2.13%,与对照组(71.35±4.92%)相比,迁移能力明显下降(p<0.001);Hoechst 33258染色结果中出现亮蓝色凋亡体;流式细胞仪检测出细胞凋亡率随芝麻素浓度的增加而增加,即芝麻素浓度在40～120 μg/mL,细胞凋亡率分别为 27.1%、36.1%、41.6%、48.4%、60.2%。4.采用壳聚糖-多壁碳纳米管(CS-MWCNT)溶液修饰玻碳电极,基于人肝癌HepG2细胞的伏安行为变化测定芝麻素对人肝癌HepG2细胞活性影响。结果表明,滴加4μL的CS-MWCNTs溶液修饰电极后,电流的响应值较好,且CS-MWCNTs溶液对细胞无明显毒副作用;当用不同浓度芝麻素(40、60、80、100、120μg/mL)作用于人肝癌HepG2细胞后,根据电流信号变化测得芝麻素对细胞的生长抑制率分别为24.06%、35.28%、43.38%、51.67%、67.5%,呈浓度依赖性地抑制人肝癌细胞生长,与传统检测方法结果一致。此法可以简便快速的检测到芝麻素诱导人肝癌细胞凋亡的作用。