血栓性疾病(局部血液凝固)是人类发病率和死亡率最高的疾病之一,可以发生在动脉或静脉循环。静脉血栓栓塞(venous thromboemboli sm, VTE)是心血管相关死亡的第三大原因,临床主要表现为深静脉血栓(deep venous thrombosis, DVT)和肺栓塞(pulmonary embolism, PE);动脉血栓性疾病(arterial thrombosis)包括心肌梗死(心脏病发作)、缺血性脑卒中(ischemic stroke, IS)和周围动脉疾病(peripheral arterial occlusion, PAO),其中中风是一种主要的致残原因,20%至70%的中风患者最终发展为DVT形成；癌症患者也因DVT和PE引发高死亡率。抗凝药物(anticoagulants)被广泛用于静脉和动脉血栓栓塞性疾病的预防和治疗。传统的抗凝药物普通肝素(UFH)、低分子量肝素(LMWH)为非胃肠道给药,需要实验监测以调整剂量。华法林(warfarin)治疗窗狭窄,起效和失效缓慢,抗凝强度被含维生素K的食物减弱,和许多药物有相互作用,有时会引起出血并发症而需要监测国际标准化比值(INR)。因此,亟待开发新一代安全、有效、使用方便的抗凝药物。凝血因子Xa (FXa)位于凝血级联的中心位置,且在凝血酶的上游,在催化凝血酶原转变成凝血酶的过程中还存在生物信号的放大。Xa因子抑制剂证明较凝血酶抑制剂抗凝更为有效。因此,FXa被公认为抗凝治疗的理想靶标,FXa抑制剂也成为抗凝药物的研究热点。中医运用中草药治疗血瘀证具有悠久的历史,血瘀与血液循环障碍、血栓形成相关联,活血化瘀与改善血液循环障碍,防止血栓形成或使生成的血栓溶解有着密切的关系。对中草药活血化瘀药理方面的研究表明,许多活血化瘀中药具有一定的抗凝作用,它们作用于凝血共同途径。前期对26种常用活血化瘀中药提取物的筛查中发现泽兰和丹参等的提取物能直接抑制FXa。本论文试图从这两种植物类活血化瘀中药中分离纯化天然的FXa小分子直接抑制成分,为以后开发口服小分子FXa抑制剂提供先导化合物。溶剂萃取法得到的泽兰乙酸乙酯部位能剂量依赖性抑制FXa活性,确定乙酸乙酯部位为泽兰的活性部位。利用活性追踪结合各种现代分离技术从泽兰的活性部位分离得到2个活性化合物,通过理化性质,核磁波谱、质谱等手段鉴定这两个化合物分别是白桦脂酸和丙三醇。丙三醇抑制活性较弱,49.83μg/mL时抑制率10.08%；白桦脂酸对FXa的半抑制浓度(ICso)为25.05μmol/L。白桦脂酸对其它丝氨酸蛋白酶如凝血酶、纤溶酶和胰蛋白酶抑制作用的ICso分别为：31.91μmol/L.14.32μmol/L和13.32μmol/L。证明白桦脂酸对FXa的专一性不强,是一种非选择性的丝氨酸蛋白酶抑制剂。溶剂萃取法得到的丹参乙酸乙酯部位能抑制FXa活性,且能剂量依赖性延长血浆凝血酶原时间(PT),确定乙酸乙酯为丹参的活性部位(同时发现该部位也抑制凝血酶活性)。利用各种现代色谱技术从丹参的活性部位分离得到13个化合物,通过理化性质,核磁波谱、质谱等手段鉴定这13个化合物分别为谷甾醇、邻苯二甲酸二丁酯、丹参新醌乙、柳杉酚、5,6-脱氢柳杉酚、丹参酮ⅡA、2-羟基庚酸甲酯、豆甾-4-烯-3-酮、5-羟甲基糠醛、齐墩果酸、熊果酸、胡萝卜苷和Oresbiusin A。2-羟基庚酸甲酯和Oresbiusin A为首次从丹参中分离得到。这些化合物中丹参酮ⅡA对FXa和凝血酶有一定的抑制作用,IC50分别为270.79μmol/L和243.27μmol/L。柳杉酚对凝血酶有一定的抑制作用,IC50为273.20μmol/L齐墩果酸对FXa的抑制作用,IC50为167.53μmol/L泽兰抑制FXa的活性成分为羽扇豆烷型的白桦脂酸,课题组同时发现牛膝抑制FXa的活性成分为齐墩果烷型的齐墩果酸的糖苷。由此推测可能五环三萜类化合物对FXa具有抑制活性。由此,对课题组从夏枯草、青风藤、甘草等植物分得的18种五环三萜类化合物及其糖苷进行抑制FXa活性的研究。结果表明除白桦脂酸以外,24-羟基-16-氧代-28-降齐墩果-12-烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸基-(1→4)-O-β-D-吡喃木糖苷、2α,3β，23-三羟基-乌苏-12-烯-28-酸、甘草次酸等具有较好的抑制活性,其中尤以甘草次酸抑制活性最强。甘草次酸对FXa抑制作用的IC50为32.56μmol/L对凝血酶、纤溶酶和胰蛋白酶抑制作用的IC50分别为465.00μmol/L、73.91μmol/L和667.70μmol/L。证明甘草次酸对FXa具有较强的专一性。本文研究了泽兰和丹参的抑制FXa的活性成分,发现白桦脂酸、丹参酮ⅡA和齐墩果酸对FXa具有一定的抑制活性。这为FXa抑制剂的研究提供了新的研究方向,尤其是五环三萜类化合物是值得进一步研究的分子模型。