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第一部分应用二代测序技术及功能预测工具对系统性红斑狼疮合并股骨头坏死相关易感基因的研究分析研究背景既往研究显示遗传相关的基因易感性在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus:SLE)患者股骨头坏死(osteonecrosis of the femoral head:ONFH)的发生中存在重要作用。例如,CR2(complement C3d receptor 2)、NOS3(nitric oxide synthase 3)、COL2A1(collagen type II alpha 1 chain)、PTPN22(protein tyrosine phosphatase non-receptor type 22)及 TRPV4(transient receptor potential cation channel subfamily V member 4)的某些基因位点均被报道参与上述合并症的发病。在此基础上,我们进一步研究该5个基因的单核苷酸变异(single nucleotide variations:SNVs)是否与SLE患者ONFH发病风险相关。实验方法应用FastTarget及Illumina Miseq测序分析技术对49例SLE合并ONFH患者进行CR2、NOS3、COL2A1、PTPN22及TRPV4基因的SNVs检测。应用BWA(http://bio-bwa.sourceforge.net/)软件将样本短序列与参考基因组hg19(http://hgdownload.soe.ucsc.edu/goldenPath/hg19/bigZips/)进行比对;采用 GATK(https://software.broadinstitute.org/gatk/best-practices/)标准流程进行校正;然后分别采用 VarScan(http://varscan.sourceforge.net/)和 GATK HaplotypeCaller(https://software.broadinstitute.org/gatk/best-practices/)两种方法检测每个样本的SNP/InDel(insertion 插入或 deletion 缺失,插入缺失标记)。应用 PolyPhen-2、SIFT及MutationTaster对非同义突变(non-synonymous)的SNVs进行功能分析。结果49例患者中有6例经检测确认存在所检测基因位点的低频SNVs。其中1例SNVs 位于NOS3(exon6:c.814G>A:p.E272K 和 exon7:c.814G>A:p.E272K.),4 例位于COL2A1(rs41263847:exon29:c.1913C>T:p.T638I,exon28:c.1706C>T:p.T569I,and rs371445823:exon8:c.580G>A:p.A194T,exon7:c.373G>A:p.A125T),另一例位于CR2(rs45573035:exon2:c.200C>G:p.T67S).结论SLE合并ONFH的发病可能与NOS3、COL2A1及CR2检测到的SNVs相关。经功能预测分析上述非同义突变可影响所编码蛋白功能,并可不同程度的影响机体疾病的发生。因此我们推测上述基因位点的SNVs通过改变遗传背景影响SLEONFH发病,提示这种合并症的出现有一定的遗传易感性,并不只是在SLE发病后治疗中应用激素所致。这些发现对于患者治疗方案选择及预后评估均有重要指导意义。第二部分胶原三股螺旋重叠蛋白1与系统性红斑狼疮疾病活动度的相关分析研究研究背景许多研究显示在胶原三股螺旋重叠蛋白1(collagen triple helix repeat containing-1:CTHRC1)在实体瘤中表达上调,在骨量、髓鞘形成、滑膜细胞和瘢痕疙瘩成纤维细胞的胶原合成中均发挥作用。近期研究发现CTHRC1参与类风湿关节炎的发病及进展。在此基础上本文拟探讨系统性红斑狼疮患者(systemic lupus erythematosus:SLE)CTHRC1表达异常是否与该病发病相关。实验方法将纳入研究的SLE患者分为病情活动组(系统性红斑狼疮疾病活动指数(SLEDAI)评分≥6)及病情不活动组(SLEDAI评分<6)。应用酶联免疫分析(enzyme-linked immunosorbent assay)检测 CTHRC1、interferon alpha、interleukin(IL)-28A及IL-28B在40例SLE患者中的血清浓度。检测结果与23例健康对照组进行比较分析。结果SLE患者血清CTHRC1蛋白水平高于健康对照组。病情活动组SLE患者血清CTHRC1蛋白水平高于非活动组。血清CTHRCI水平与SLEDAI及血沉成正相关,与补体3和4成负相关。并且存在关节炎和贫血的SLE患者血清CTHRC1水平高于无上述症状者。结论本次研究结果显示CTHRC1可能在SLE发病中具有重要作用,并与疾病活动度正相关,且可能参与SLE关节炎及贫血的出现。因此,CTHRC1可能为SLE发病机制及治疗提供了新的研究靶点。第三部分MicroRNA-223通过下调PBMC中NLRP3表达参与系统性红斑狼疮的发病研究背景固有免疫及适应性免疫系统均在系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)的发病过程发挥作用。既往研究显示MicroRNA-223(miR-223)在免疫系统的发育和免疫相关性疾病的发生发展中具重要作用。目前关于miR-223在SLE发病中所起作用的研究较少,尚未有miR223通过参与调控NLRP3炎性小体在狼疮发病中作用的研究。本研究通过检测SLE患者外周血单个核细胞(PBMC)中MicroRNA-223(miR-223)及NLRP3炎性小体组分(NLRP3、ASC、Caspase-1)mRNA水平,分析其在SLE发病中的作用及临床意义。实验方法实时荧光定量PCR检测35例SLE患者及30例健康对照PBMC中miR-223及NLRP3炎性小体组分mRNA水平,分析其与狼疮患者临床及实验室指标及SLE疾病活动度评分(SLEDAI)的相关性。结果SLE患者PBMC中miR-223、Caspase-1 mRNA水平明显高于健康对照,NLRP3、ASC mRNA水平低于健康对照;相关性分析显示患者组miR-223与NLRP3 mRNA水平呈负相关,与ASC、Caspase-1mRNA水平无相关性;患者组miR-223 mRNA水平与抗dsDNA抗体、血沉、SLEDAI评分呈正相关,与AnuA无相关性;狼疮肾炎(LN)患者与无肾损害狼疮患者PBMC中miR-223水平无统计学差异。结论SLE 患者 PBMC 中 miR-223 和 Caspase-1 mRNA 增加,NLRP3 和 ASC 的mRNA水平降低,且miR-223水平与疾病活动度相关,与肾损害无明显相关,miR-223可能通过下调NLRP3在PBMC中的表达参与SLE发病。