论文部分内容阅读
目的:1探讨荧光原位杂交技术(FISH)检测宫颈脱落细胞hTERC基因的取材及制片方法。2探讨正常与异常宫颈鳞状上皮中hTERC基因的表达情况及临床意义。3分析高危型HPV感染的CIN中hTERC基因的表达情况与临床意义。方法:1 FISH技术的制片方法;收集2007年9月至2008年3月,解放军总医院妇科门诊就诊282例妇女的宫颈脱落细胞标本,根据不同的取材及制片方法分为3组:直接涂片法(15张)、TCT制片法(205张)、低渗滴片法(62张)。应用FISH技术,对上述玻片进行hTERC基因检测,比较不同制片方法的细胞数量、玻片背景、荧光信号强度和杂交成功率。2选择行细胞学检查患者的宫颈脱落细胞305例为研究对象,依据细胞学诊断分为五组:正常组、ASCUS组、ASC-H组、LSIL组、HSIL组,同时选择细胞正常妇女的宫颈脱落细胞20例为对照组建立实验室阈值;对其中115例患者行阴道镜及活检,依据组织学结果分为四组:正常组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ/SCC组,对以上样本均应用FISH技术检测hTERC基因的表达情况。3采用HPV基因杂交信号捕获检测技术(HC2)法,对上述115例组织学诊断为正常、CIN、SCC患者的宫颈分泌物行高危型HPV-DNA检测,分析高危型HPV感染与hTERC基因表达在不同级别宫颈病变中的关系。结果:1不同的取材及制片方法杂交成功率不同:共进行试验282例,总杂交成功率为74.1%(208/282)。直接涂片法、TCT制片法、低渗滴片法杂交成功率分别为53.3%、81.9%、51.6%,TCT制片组成功率明显高于其它两组,差异具有显著性(p＜0.05)。同时,TCT组的细胞数量及分布、背景干净程度、荧光信号满意度均优于其它组。2细胞学分级中正常组、ASCUS组、ASC-H组、LSIL组、HSIL组hTERC基因阳性表达率分别为8.5%、11.3%、25.8%、41.0%、77.4%。ASC-H组、LSIL组、HSIL组与正常组比较,hTERC基因阳性表达率有显著差异(P＜0.05)。其中ASCUS组与LSIL组、HSIL组,ASC-H组与HSIL组,LSIL组与HSIL组差异有显著统计学意义(P＜0.05);组织学分级中,正常组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ/SCC组hTERC基因阳性表达率分别为7.3%、38.5%、63.2%、78.6%。CINⅠ组、CINⅡ组、C1NⅢ/SCC组与正常组比较,hTERC基因阳性率有显著差异(P＜0.05)。CINⅠ组与CINⅢ/SCC组比较,差异有显著统计学意义(P＜0.05)。随组织学病变程度增加,hTERC基因阳性率增加。3 hTERC基因检测CIN和HSIL/SCC的敏感度、特异度hTERC基因检测CIN的敏感度、特异度分别为67.56%、92.68%;hTERC基因检测HSIL/SCC的敏感度、特异度分别为78.57%、92.68%。4在高危型HPV感染的62例CIN中,hTERC基因扩增比例75.8%(47/62),其中CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中扩增比例分别为80.0%(4/5)、64.7%(11/17)、80.0%(32/40);而在12例HPV阴性病例中,hTERC基因扩增的比例为25.0%(3/12)。HPV感染组与非感染组间比较具有显著性差异)。在50例hTERC基因扩增阳性的病例中,HPV阳性所占的比例为94.0%(47/50),而HPV阴性所占比例仅为6.0%(3/50)。CIN组与正常对照组比较,hTERC基因扩增比例增加。在正常对照的宫颈细胞中,3号染色体hTERC基因多表达为两个杂交信号,而在CIN组细胞中可观察到明确的超二倍体现象,异常扩增类型多为2:3、2:4、3:3、4:4等。随病变进展,多倍体比例增加。结论:1应用双色FISH技术检测宫颈脱落细胞hTERC基因时,TCT制片法优于直接涂片法与低渗滴片法,杂交成功率最高。2 hTERC基因拷贝数在宫颈上皮内高度病变有显著扩增,随病变程度进展阳性率增加,可显著区分正常组与CIN组;同时CIN中,在低度病变与高度病变有显著统计学意义,可作为预测宫颈癌前病变进展中的监测指标。3在高危型HPV感染中,hTERC基因扩增比例明显高于HPV阴性组,提示高危型HPV与hTERC基因扩增有相关性。