论文部分内容阅读
目的:1、比较正常小鼠、干眼小鼠、糖尿病小鼠、糖尿病干眼小鼠干眼临床指标的变化。2、探讨糖尿病与干燥环境所致干眼小鼠的泪腺组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptor,PPARγ)与焦亡相关基因的表达。方法:将148只健康雄性C57BL/6J小鼠采用随机数字表法分为四组造模:正常对照组(normal组)、干眼组(dry组)、糖尿病组(diabetes组)、糖尿病干眼组(diabetes and dry组)。糖尿病组造模方式为小鼠腹腔注射2%链脲佐菌素(streptozocin,STZ)(溶于1%柠檬酸钠缓冲溶液中),干眼组造模方式为将小鼠置于智能干燥风箱中,糖尿病干眼组造模方式为小鼠腹腔注射2%STZ溶液腹腔注射,同时小鼠放置于智能干燥风箱内。以血糖≥16.7mmol/L作为小鼠糖尿病模型诱导成功的标准。小鼠共饲养10周,每周检测所有小鼠体重、血糖、角膜敏感度、泪液分泌(酚红棉线)、角膜荧光素钠染色。每2周每组随机处死6只小鼠,取小鼠双侧泪腺,行定量聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,q PCR)检测泪腺组织白细胞介素1β(Interleukin–1,IL-1β)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1、Caspase-1)、PPARγm RNA的表达量,行酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测泪腺组织IL-1β、Caspase-1、PPARγ、NOD样受体家族3炎症小体(NOD样受体热蛋白结构域3,NLRP3)蛋白表达量。结果:与正常对照组相比,干眼组、糖尿病组、糖尿病干眼组均于第4周起出现角膜敏感度下降、第四周起出现泪液分泌减少、角膜点染增多,且干眼与糖尿病的叠加使小鼠相关体征更严重。第四周,与正常对照组小鼠相比,干眼组、糖尿病组、糖尿病干眼组PPARγm RNA、蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05);正常对照组、干眼组、糖尿病组、糖尿病干眼组Caspase-1 m RNA、蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05);正常对照组、干眼组、糖尿病组、糖尿病干眼组IL-1βm RNA、蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05);正常对照组、干眼组、糖尿病组、糖尿病干眼组NLRP3蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。第六周,与正常对照组小鼠相比,干眼组、糖尿病组、糖尿病干眼组PPARγm RNA表达量差异无统计学意义(P>0.05);糖尿病组、糖尿病干眼组PPARγ蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05);干眼组PPARγ蛋白表达量下调,差异有统计学意义(P<0.05)。正常对照组、干眼组、糖尿病组、糖尿病干眼组Caspase-1 m RNA、蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。正常对照组、干眼组、糖尿病组、糖尿病干眼组IL-1βm RNA表达量差异无统计学意义(P>0.05);正常对照组、干眼组、糖尿病组、IL-1β蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05),糖尿病干眼组IL-1β蛋白表达量上调,差异有统计学意义(P<0.05)。正常对照组、干眼组、糖尿病组、糖尿病干眼组NLRP3表达量差异无统计学意义(P>0.05)。第八周,与正常对照组小鼠相比,干眼组、糖尿病组PPARγm RNA表达量差异无统计学意义(P>0.05),糖尿病干眼组PPARγm RNA表达量下调,差异有统计学意义(P<0.05);糖尿病组PPARγ蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05),干眼组PPARγ蛋白表达量下调,差异有统计学意义(P<0.05),糖尿病干眼组PPARγ蛋白表达量下调,差异有统计学意义(P<0.01)。与正常对照组小鼠相比,干眼组、糖尿病组、糖尿病干眼组Caspase-1 m RNA及蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。干眼组IL-1βm RNA表达量差异无统计学意义(P>0.05),糖尿病组IL-1βm RNA表达量上调,差异有统计学意义(P<0.05),糖尿病干眼组IL-1βm RNA表达量上调,差异有统计学意义(P<0.01);糖尿病组IL-1β蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05),干眼组、糖尿病干眼组IL-1β蛋白表达量上调,差异有统计学意义(P<0.05)。干眼组、糖尿病、糖尿病干眼组NLRP3表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.随造模时间延长,干眼组、糖尿病组、糖尿病干眼组小鼠角膜知觉均逐渐下降、泪液分泌均逐渐减少、角膜点染均逐渐增加。2.干眼、干眼与糖尿病联合可导致小鼠泪腺中PPARγ表达量下降;干眼、糖尿病、糖尿病与干眼联合可使小鼠泪腺IL-1β表达量上升。