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目的通过已成功构建的重组核酸质粒pcDNA3.1(+)/NP转染Hela细胞,探讨体外不同板蓝根制剂对甲型流感病毒NP基因的作用,为板蓝根的抗甲型流感病毒治疗提供新的研究思路。方法采用传统水煮浸法提取的板蓝根水煎剂和有机溶剂浸泡法提取的板蓝根凝集素及板蓝根注射液,将不同浓度的三种板蓝根制剂分别加入Hela细胞的培养液中,观察每种制剂引起的细胞病变并评价其对Hela细胞的毒性大小,分别确定三种制剂的最大无毒浓度。将已构建的基因表达载体pcDNA3.1(+)/NP用脂质体介导法转染Hela细胞48h,然后用间接免疫荧光法和胶体金免疫层析法检测NP基因的表达情况。再将三种板蓝根制剂的最大无毒浓度的下一倍比浓度作为试验浓度,作用于转染的Hela细胞,采用间接免疫荧光法和胶体金免疫层析法分别测定三种板蓝根制剂对转染的Hela细胞中NP蛋白的抑制作用。并设立构建质粒转染实验组及药物对照组、细胞对照组和空质粒对照组。结果1.三种不同板蓝根制剂对Hela细胞的试验浓度分别为:板蓝根注射液1.95mg/ml、板蓝根水煎剂2.60mg/ml、板蓝根凝集素0.78mg/ml。2.经抽提构建质粒pcDNA3.1(+)/NP转染Hela细胞,培养上清液经胶体金免疫层析法证实胶体金试验阳性。经免疫荧光技术在荧光显微镜下可观察到表达NP的细胞质发出较强的绿色荧光,并证实该质粒表达的NP蛋白定位于细胞浆中。3.构建质粒转染实验组、板蓝根注射液实验组、板蓝根水煎剂实验组胶体金试验阳性,板蓝根凝集素实验组胶体金试验阴性;经间接免疫荧光法在荧光显微镜下可观察到构建质粒转染实验组、板蓝根注射液实验组、板蓝根水煎剂实验组中表达NP的细胞仍发出较强的绿色荧光,且表达的NP蛋白定位于细胞浆中,板蓝根凝集素实验组中表达NP的细胞未出现较强的绿色荧光。对照组结果均为阴性。板蓝根注射液及水煎剂对流感病毒NP基因的作用与构建质粒转染实验组相同,而板蓝根凝集素对NP基因的作用不同于构建质粒转染实验组。结论:1.免疫荧光法和胶体金层析法证实了NP基因能够在Hela细胞中表达。2.板蓝根注射液及板蓝根水煎剂不能抑制甲型流感病毒核蛋白基因的表达,而板蓝根凝集素可抑制NP基因在Hela细胞中的表达。本实验研究证明,板蓝根凝集素能明显抑制NP基因的表达,它为研究抗流感病毒药物的治疗和机制提供了一定的理论依据。