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目的:探讨线粒体凋亡通路是否参与蓝光照射诱导体外培养的人RPE细胞凋亡过程。
方法:实验分为5组:A无光照组;B单纯光照组;C光照+硝苯地平组;D光照+Calphostin c组,E光照+PMA组。用2000±500Lx强度的蓝光照射人RPE细胞6h,24h后终止培养后,采用Western-blots法检测各组RPE细胞内Bax、Bcl-2、Bcl-xL、caspase-9蛋白表达量的变化。
结果:Western blot检测显示:无光照组和单纯光照组均可见Bax及caspase-9蛋白条带,分子量分别位于23KD及37KD;与无光照组比较,单纯光照组的Bax及caspase-9蛋白表达增加,差异有统计学意义(t=-4.409,-4.168;P=0.012,0.014)。无光照组和单纯光照组均可见Bcl-2及Bcl-xL蛋白条带,分子量分别位于26KD及30KD;与无光照组比较,单纯光照组Bcl-2及Bcl-xL蛋白表达减少,差异有统计学意义(t=7.575,6.068;P=0.002,0.004)。与单纯光照组比较,光照+PMA组caspase-9蛋白表达升高(p=0.013);光照+硝苯地平组及光照+Calphostin c组caspase-9蛋白表达无统计学意义(p=0.091,0.681);光照+硝苯地平组与光照+Calphostin c组比较差异无统计学意义(P=0.047);光照+PMA组caspase-9蛋白表达高于光照+Calphostin c组及光照+硝苯地平组,差异有统计学意义(p=0.024、0.001)。
结论:(1)蓝光致体外培养的人RPE细胞凋亡过程中caspase-9表达增强,凋亡抑制基因Bcl-2及bcl-xl表达下降,凋亡促进基因Bax蛋白表达增强;(2)线粒体凋亡通路参与蓝光照射诱导体外培养的人RPE细胞凋亡过程;(3)PKC通路可能参与了蓝光致体外培养人RPE细胞凋亡。