【摘 要】
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该文研究了含有分子陪伴GroEL/ES(GroE)高表达质粒pND5的重组大肠杆菌的最佳培养和热诱导条件,使分子陪伴GroE在重组菌体内得到了高效的表达,并利用DEAE-Toyopearl650S离子交
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该文研究了含有分子陪伴GroEL/ES(GroE)高表达质粒pND5的重组大肠杆菌的最佳培养和热诱导条件,使分子陪伴GroE在重组菌体内得到了高效的表达,并利用DEAE-Toyopearl650S离子交换色谱分离纯化了GroEL/ES蛋白.将分离提纯的分子陪伴GroEL固定在甲酰基-Cellulofine凝胶载体上,研究了其对变性溶菌酶的复性作用.确定了固定化GroEL辅助变性溶菌酶复性的最佳固定化密度范围为10~30mg GroEL/g凝胶、最佳复性温度为37℃、最佳pH值范围为6~8.当固定化分子陪伴与溶菌酶的摩尔比大于5时,能取得较好的复性效果;复性液中盐酸胍的浓度处在40~80mmol/dm<3>之间时固定化GroEL能较好的辅助溶菌酶复性;溶菌酶的复性效果随着浓度的升高而降低.此外固定化GroEL可反复利用.当采用脉冲进样,上样料液中溶菌酶浓度为1mg/mL,总进样蛋白为3mg,洗脱流速为0.045mL/min,复性缓冲液中盐酸胍和ATP的浓度分别为1mol/dm<3>和2mmol/dm<3>时,溶菌酶的总活性收率可达到81%.固定化GroEL色谱柱可长期反复多次使用,体现出其具有广阔的应用前景和实用价值.
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