论文部分内容阅读
本实验以耐低氮(N)、磷(P)型坛紫菜纯系9号Ⅳ为实验材料,以野生型坛紫菜叶状体为对照,分别从生长特征、品质、生理生化以及基因差异表达四个方面对坛紫菜叶状体在低N、P胁迫下的响应特征进行了初步探讨。结果表明:(1)生长特征方面:在两种低N、P培养液胁迫下,耐低N、P型坛紫菜在胁迫10d以后,藻体颜色由正常时的褐绿色变成翠绿色,从胁迫的第6d起,部分细胞出现类似凋亡的现象,胁迫10d后移到正常培养液下仍然能够恢复正常,而野生型坛紫菜叶状体颜色逐渐变淡,在低N、P胁迫的第4d就出现细胞质外溢,并逐渐坏死的现象,移到正常培养液中,不能恢复正常生长。(2)品质方面:在两种低N、P培养液胁迫下,耐低N、P型和野生型坛紫菜的品质由于氮、磷的缺乏都显著下降,由此表明N、P是决定坛紫菜品质的重要元素。(3)生理指标方面:分别对自由基含量、过氧化氢(H2O2)含量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性和游离脯氨酸(Pro)含量进行测定,结果发现在低N、P胁迫下,各指标随着胁迫天数的增加均呈现出动态变化的特征,由此推测耐低N、P型坛紫菜叶状体应答低N、P胁迫的生理响应过程为:低N、P胁迫→活性氧含量上升→细胞膜氧化受损,产生大量膜脂过氧化物→细胞感受到过量的活性氧信号→抗氧化系统和渗透压调节系统共同响应,清除活性氧→自由基含量下降。而野生型坛紫菜在低N、P胁迫下只能启动渗透调节系统。(4)通过ACP技术分别对9号Ⅳ叶状体在低N、P培养液下胁迫培养0d与胁迫培养6d的差异表达基因进行筛选,得到了大小分别为385bp、355bp、920bp、683bp的差异表达基因片段,并对其中的三条DDL-1、DDL-3、DDL-4基因进行了qPCR分析,发现在胁迫的不同时间水平下,各基因表达水平也发生着显著变化。