四环素类药物主要包括四环素、土霉素、金霉素等,由于较高浓度时其具有良好的杀菌作用,所以被广泛的应用于各个领域,也就不可避免的出现了滥用现象,造成了严重的药物残留。而四环素类药物可引起人类的过敏反应等一系列疾病,对人体和环境具有严重的危害。现阶段针对于四环素类药物的检测方法存在着操作繁琐、检测费用高等不适合推广使用的缺点,建立快速灵敏的四环素类药物检测方法十分必要。胶体金免疫层析试纸条法自发现至今已在多个领域被普遍使用,主要就是其快速高效、安全简便。本文对试纸条制备过程中的条件进行探索和优化,从而制得灵敏度高的四环素类药物胶体金免疫层析试纸条。本文胶体金的制备主要是利用柠檬酸三钠还原法,并通过研究对制备过程中影响因素进行优化,最终在先加入100 m L 0.01%的氯金酸溶液,后加入0.5 m L 4%柠檬酸三钠溶液,在转速是200 r/min,溶液变红后控制温度档是400℃(沸腾时实际温度为100℃),加热时间是10 min条件下制得了本试验所需粒径为20 nm左右胶体金溶液。将制得的胶体金放置至室温后用0.22μm滤膜进行过滤,并取过滤后的胶体金利用紫外可见分光光度计对其进行光谱扫描,从而可以初步判定胶体金的质量。经过初步判定合格的胶体金,可以用来进行下一步胶体金标记抗体试验。通过对影响胶体金标记的溶液p H、标记时间、加入抗体的稀释倍数、抗体的具体加入量等进行了系列的研究,在1 m L胶体金溶液中加入5μL 0.2 mol/L的K2CO3使溶液的p H大约为8.0,标记时间为30 min,抗体稀释倍数是6倍、抗体加入量是9.6μg条件下制得了所需金标抗体,并对所制得金标抗体质量进行了初步判定。通过对NC膜的选择,包被液中离子强度、包被浓度、金标垫前处理等因素的研究,在使用Millipore 135型号的NC膜,包被液中Na Cl的浓度为8.5 g/L,检测线上使用浓度为1.0 mg/m L的四环素类抗原进行包被,质控线上使用浓度是0.75 mg/m L羊抗鼠二抗进行包被的条件下制得了本试验所需试纸条。并对试纸条针对标准品的检测灵敏度、针对相似结构物质的特异性、自身稳定性、同批或不同批次之间的重复性等进行了研究。本文最终所制得的试纸条,对四环素标准品的检测灵敏度为20μg/L、金霉素标准品的灵敏度为20μg/L、土霉素标准品的灵敏度为25μg/L。在对虾肉的实际检测中,本试纸条的灵敏度可达80μg/kg。