论文部分内容阅读
缺血再灌注损伤的防治一直是心血管领域研究的重点课题。缺血预适应（ischemic preconditionging，IPC）是体内最强大的保护机制，是一种多元性细胞防御现象（1）。IPC的保护作用不仅存在于器官水平，而且存在于细胞水平，不仅可以保护心肌细胞，而且可以保护血管内皮细胞，血管平滑肌细胞。这一现象的发现，为缺血心肌的保护及其机制的探讨开辟了新的领域。且目前的研究已经明确的证实缺氧预处理和缺血预处理具有相似的效应。IPC对心肌的保护作用具有双时相性，即早期或经典预处理和晚期预处理或延迟性保护作用。早期预处理的保护作用时间窗较窄，必须在缺血再灌注损伤前给予，故临床可操作性不强，相反晚期预处理作用时间跨度大，在临床运用时更有可行性和便利性，因此，更具实用价值和开发意义。由于缺血本身是一种损伤，实施损伤性预处理临床还难以接受，目前诱导预处理的研究已从缺血、生物、物理、化学源性扩展到药物性预处理。药物性预处理（pharmacologic preconditioning）是通过药物激发或模拟机体内源性物质呈现的心脏保护作用。血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）具有药物预适应作用。ACEI通过诱导或增强预处理早期心脏保护作用已有较多研究，而诱导预处理的延迟保护作用的报道不多；福辛普利作为三代ACEI，因其作用强且持续时间长，肝肾双重消除，不良反应轻，而更具有临床应用和研究价值，其延迟保护作用目前尚无报道。关于在ACEI晚期预适应中钙转运及其与L-型钙离子通道、钠钙交换电流的作用及其机制；关于ACEI对血管内皮细胞缺血再灌注（缺氧复氧）损伤的延迟保护作用目前均尚见未系统报道。因此，我们的实验分别建立心肌细胞和血管内皮细胞缺血再灌注（缺氧复氧）损伤模型，选用卡托普利（ACEI代表药，非前体药）和福辛普利，探讨ACEI预适应在心肌的延迟保护作用中钙转运及L型钙通道、钠钙交换电流的作用；和ACEI对血管内皮的延迟保护作用及其机制，为其抗缺血再灌注损伤作用提供实验依据和理论基础。 <WP=92>一 ACEI预处理对缺血再灌注心肌的延迟保护作用我们前期的实验研究证明：血管紧张素转换酶抑制剂（angiotensin converting-enzyme inhibitor ACEI）--- 福辛普利，具有延迟心脏保护作用，既其晚期预适应作用可减轻缺血再灌注损伤。表现在，（1）减轻缺血再灌注损伤引起的心肌细胞坏死和凋亡、心肌顿抑、再灌注性心律失常；（2）改善缺血再灌注损伤引起的心肌细胞电生理参数的异常变化,改善缺血心肌间传导特性,减轻正常和缺血心肌间复极的不均匀性,可能为降低折返性心律失常的电生理机制。进一步的实验旨在探讨钙转运及其L-型钙通道、钠钙交换体在缺血再灌注（缺氧复氧）损伤、ACEI晚期预适应中的作用。1. 卡托普利晚期预适应对缺氧复氧心肌细胞[Ca2+]i的影响制备乳鼠培养心室肌细胞缺血再灌注模型，采用FLUO-3荧光探针，流式细胞分析技术从单细胞水平探讨卡托普利晚期预适应对[Ca2+]i的影响。研究结果表明：（1）心肌细胞在常氧下（对照组）[Ca2+]i为414.08±37.40，缺氧复氧时789.42±9.05，二者比较有显著性差异，这表明心肌细胞缺氧复氧时存在钙超载；（2）缺氧预适应组[Ca2+]i为507.08±31.89；卡托普利预适应组为593.84±5.06，二者与缺氧预适应组比较差异显著（P<0.01,）,与对照组比较也有显著性差异（P<0.05），表明缺氧预适应和卡托普利预适应均可抑制缺氧再灌注时的钙超载；但又有轻度钙内流增加，可能为启动预适应的机制之一。（3）缺氧预适应与卡托普利预适应比较也有显著性差异（P<0.05），缺氧预适应对钙内流的抑制作用更为突出。（4）在细胞悬液中预先分别加入PKC 阻断剂、PDTC 、L-NAME 作用30min后再加入卡托普利所测得[Ca2+]i为675.90(32.08，700.27(36.95、688.75(11.09；与卡托普利预适应组比较[Ca2+]i 增加（P<0.05）；与缺氧复氧组比较[Ca2+]i 仍降低（P<0.05）。表明PKC阻断剂、PDTC和L-NAME分别部分阻断卡托普利对[Ca2+]i的作用。2. ACEI晚期预适应对再灌注期L-型钙通道的影响（1）成年豚鼠：心室肌细胞L型钙通道电流峰值在膜电位电压0mV时最大。缺血再灌注状态下L型钙通道电流峰值较对照组明显下降（-237.71±17.70pA vs <WP=93>-286.00±21.15pA p<0.01，n=7）；福辛普利预处理晚期L型钙通道电流峰值，与缺血再灌注组比较有明显差异（-265.57±20.20pA vs -237.71±17.70pA ，p<0.05），与正常对照组比较差异无显著性（-265.57±20.20 pA vs -237.71±17.70pA p﹥0.05）（见图8，9）。（2）乳鼠培养心室肌细胞：在缺血缺氧再灌注条件下，最大内向峰值钙电流在0mV为-204.17±28.48,pA，与正常对照组-266.83±18.63,pA比较P<0.001。在缺氧预适应组和提前24小时加入卡托普利，其钙通道电流峰值分别为-256.33±9.46和-251.17±11.44pA，与缺氧再灌注组比较有显著差异P<0.01；与正常对照组相比，没有统计学意义。当加入PKC阻断剂和维拉帕米0.5小时后，加入卡托普利24小时,应用同样的实验方法记录钙通道电流，钙通道电流峰值在0mV没有变化，但幅值有所改变，分别为-234.67±17.94和-218.33±29.74,pA，分别与卡托普利组比较均有显著?