论文部分内容阅读
采用香菇(Lentinula edodes)两个栽培菌株L205和武香1号各自的孢子单核体L6和W26进行杂交(L6×W26)、出菇和孢子单核体制备实验,获得了148个孢子单核体的遗传分离群体,通过杂交配对观察锁状联合的有无、核迁移实验和OWE-SOJ实验,准确鉴定了此分离群体中个菌株的交配型。通过SSR、SRAP、TRAP和一个信息素受体基因片段对得到的香菇遗传分离群体进行分子扩增分析：从77对SSR引物中筛选得到2对具有多态性条带的引物；在56对SRAP引物组合中,25对引物组合表现出较高的多态性,多态性条带在4-17条之间,共扩增得到225个多态性条带,平均每对引物组合扩增得到9条条带；通过对36个与香菇子实体发育相关基因的分析,设计TRAP固定引物,与随机引物组合,共得到43对TRAP引物组合,TRAP分析总计扩增得到474个多态性条带,平均每对引物产生11.1个多态性条带。SRAP和TRAP都表现出较高的扩增效率,有利于高密度遗传连锁图谱的构建；根据本实验室前期所得到的香菇交配型B因子信息素受体基因片段,进行特异性引物的设计,在分离群体中进行扩增实验,扩增结果具有多态性,扩增片段大小为371bp,与理论设计片段一致。702条多态性条带(2个SSR标记、一个信息素受体基因片段、225个SRAP标记位点、474个TRAP标记)和两个交配型位点,运用Joinmap作图软件进行数据分析,构建了一个包含有581个标记和位点,11个连锁群的香菇高密度分子遗传连锁图谱。图谱总长度为963.2 cM,连锁群的大小在21cM～151 cM之间,平均大小为87.6cM；标记间的距离在0-20.45 cM之间,标记间的平均距离为1.70cM；两个交配型因子MAT-A、MAT-B分别定位在连锁群LG 3和LG 10上,大小分别为111cM和39cM；与MAT-A位点邻近的两个标记zip1-4-295和exg2-3-180距离MAT-A位点分别为6.6 cM和7.3 cM；与MAT-B位点邻近的两个标记zip1-4-390和expl-4-190与MAT-B位点的距离分别为2.48 cM和6.55 cM；信息素受体基因片段"ste-1-371"(STE 3)定位在LG 10连锁群上,但并未与MAT-B位点紧密连锁,两标记间的遗传距离为6.93 cM,两标记间不连锁的原因可能与基因转座或者基因插入等有关；本实验所构建的香菇高密度分子遗传连锁图谱在10cM、5 cM和2 cM以内一个标记的覆盖度分别为99.9%、98.9%和83.7%。平均图距为1.70 cM的香菇遗传连锁图谱是迄今为止的香菇遗传连锁图谱研究中图谱密度最高的,在5 cM遗传距离内一个标记的覆盖度高达98.9%,这与采用了高扩增效率的SRAP和TRAP标记直接相关,为将来的图位克隆、QTL数量性状定位、分子遗传育种等奠定了良好的基础。