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目的:建立文冠果花水提取物(WE)及乙醇提取物(EE)化学成分定量分析方法;确立半数致死量(LD50)和最大给药剂量;采用丙酸睾酮(TP)诱导的良性前列腺增生(BPH)模型评价WE及EE抑制前列增生的药效,并对其分子机制进行初探,从整体评价WE及EE抑制前列腺增生的作用。方法:1.化学成分定量分析:制备文冠果花提取物,分别用蒸馏水和乙醇2种溶剂提取,利用紫外可见光光度计(UV-Vis)测定WE及EE所含多糖与总黄酮。2.急性毒理试验:采用通用的急性毒理试验方法评价WE及EE的毒性情况,按不同梯度设计给药剂量预测LD50;并结合LD50数据推断测试出最大给药量。3.文冠果花水提取物及醇提取物对BPH动物模型的药效与初步分子机制研究:将66只12周龄雄性Wistar大鼠,采用皮下注射丙酸睾酮(TP)诱导大鼠BPH模型,连续4周应用前列腺指数及血清DHT评价模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组(M)、阳性对照组(P,10mg/kg)、文冠果花水提物高剂量组(WEH,480mg/kg)、文冠果花水提物低剂量组(WEL,120mg/kg)、文冠果花乙醇提物高剂量组(EEH,550mg/kg)、文冠果花乙醇提物高剂量组(EEL,140mg/kg),以正常大鼠为正常对照组(N),每组8只。在1周造模后预防性给药,每天1次灌胃给药,连续28天。第29天注射水合氯醛麻醉各组老鼠,取血清和前列腺组织。检测指标如下:(1)给药期间记录体重变化趋势;(2)视觉对比各组前列腺组织,观察前列腺指数(PI)变化;(3)HE染色观察各组前列腺组织上皮和间质;(4)酶联免疫法(ELISA)测定血清及前列腺匀浆液DHT含量;(5)ELISA法测定前列腺匀浆液IL-6、IL-8、TNF-α等炎症因子;(6)ELISA法测定前列腺特异抗原(PSA)含量;(7)免疫组织化学(IHC)分析前列腺组织中VEGF-A及b FGF分布,并半定量预测其在各组中含量;(8)蛋白质免疫印迹法(WB)检测各组前列腺组织中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达量。结果:1.紫外可见光光度计分析结果:WE及EE所含多糖在24.24~121.2μg之间有良好的线性关系(R2=0.9983),所含总黄酮在14.54~87.24μg之间有良好的线性关系(R2=0.9996);WE多糖含量为9.12%,总黄酮含量为4.30%;EE多糖含量为4.68%,总黄酮含量为5.67%。2.急性毒理试验结果显示:在最大浓度给药后未出现死亡现象,故无法给出LD50,通过最大耐受量测试发现最大给药量大于30g/kg,认为该剂量下WE和EE无明显毒性。3.WE及EE对BHP大鼠的药效与分子机制初探结果如下:(1)体重随给药周期延长总体呈上升趋势,与N组相比,M组体重呈上升趋势,但体重变化无统计学意义(P>0.05);与M组相比,各组也呈上升趋势,但第4周时P组、WEH组、WEL组和EEL组有下降趋势,其中EEL组有统计学意义(P<0.05),其余各组无统计学意义(P>0.05)。(2)与N组相比TP可以显著升高M组大鼠前列腺指数,有显著性差异(P<0.01),表明造模成功;与M组相比文冠果花各提取物组抑制了前列腺指数的升高且有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。(3)与N组相比M组间质成分显著增多,腺泡体积增大,腺上皮细胞排序紊乱,结蹄组织增生明显;与M组相比,WEH和EEH组间质成分有所减小,腺上皮细胞排序紊乱的现象在不同程度上较为缓解,有少部分的腺泡排序密集现象。(4)与N组相比,M组血清和前列腺组织中的DHT均升高且有统计学意义(P<0.01),此结果表明造模成功;与M组相比各提取物DHT含量降低且有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。(5)与N组相比,M组IL-6、IL-8和TNF-α含量均有所升高且有统计学意义(P<0.01);与M组相比,P组、EEH组和EEL组IL-6含量有下降趋势且有统计学意义(P<0.05),其余各组无统计学意义(P>0.05);与M组相比,WEL组、EEH组和EEL组IL-8含量明显下降,有统计学意义(P<0.01),其余各组无统计学意义(P>0.05);与M组相比,P组、WEH组和EEH组TNF-α含量下降趋势且有统计学意义(P<0.05),其余各组无统计学意义(P>0.05)。(6)与N组相比,M组PSA含量高于N组,且有统计学意义(P<0.05);与M组相比其余各组PSA有下降趋势,但无统计学意义(P>0.05)。(7)与N组相比,M组VEGF-A蛋白阳性表达量明显增加且差异具有统计学意义(P<0.01);与M组相比,P组、WEH组、WEL组、EEH组和EEL组VEGF-A蛋白阳性表达量明显下降,均有统计学意义(P<0.05)。与N组相比,M组b FGF蛋白阳性表达量明显增加且差异具有统计学意义(P<0.001);与M组相比,P组、WEH组、WEL组、EEH组和EEL组b GFG蛋白阳性表达量明显下降,均有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。(8)与N组相比,M组前列腺组织PCNA蛋白表达含量显著上升,且有统计学意义(P<0.01);与M组相比,各组前列腺组织PCNA蛋白表达量有下降趋势,其中P组、WEH组和EEH组下降趋势明显,有统计学意义(P<0.01,P<0.05),其余各组无统计学意义(P>0.05)。结论:本研究采用经典药理学方法建立BPH动物模型,发现文冠果花提取物具有抑制或预防良性前列腺增生作用的可能性;药效实验结果表明WE对BPH动物模型具有降低前列腺指数,改善前列腺组织间质与上皮细胞的紊乱现象且缓解增生程度,降低前列腺组织DHT的含量;初步机制可能与激素水平和增殖凋亡细胞调控生长因子有关,从而增加前列腺组织上皮与间质成分的增生,b FGF蛋白低表达降低VEGF-A的分泌可能通过诱导血管生成细胞减少进而降低PCNA生成相关,发挥抑制前列腺增生的主要物质基础可能与极性较大的小分子或水溶性大分子有关,有待进一步进行物质基础探索。此外,文冠果花提取物可能对前列腺组织细胞因子如IL-6、IL-8和TNF-α等有干预作用;文冠果花是传统蒙药药用部位以外的非药用部位,结合民间用药调研基础探究文冠果花新药用价值不仅使蒙药资源可持续利用,也可以扩大其药用价值,降低非药用部位的浪费。相关研究也发现文冠果花提取物可通过抑制前列腺增生发挥药效,从而为治疗或预防良性前列腺增生提供了初步的科学依据。