从蛹虫草栽培残渣中提取分离虫草素及其抑制肿瘤活性的研究

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虫草素即3,-脱氧腺苷,是蛹虫草的活性成分之一。近50多年的研究发现虫草素有抑制肿瘤、抗真菌和增强免疫力的作用,已引起各国科学研究的高度重视。本研究课题以蛹虫草培养基残基为原料,系统深入研究了虫草素检测方法、提取纯化工艺、‘纯度鉴定及虫草素的抗肿瘤活性研究等。建立了虫草素高效液相色谱法,色谱标准曲线方程为:y=64055x-26.599,线性相关系数γ=0.9999,线性范围为:0.01-0.1 mg/mL,精密度及稳定性实验的RSD均小于1%。本法简单快速,虫草素能够达到很好的分离效果。探索从培养基残基中提取虫草素的技术,优化了虫草素水提醇沉的工艺。得出最佳水提醇沉工艺条件:40℃提取4次,料液比为1:20,每次提取2 h。提取液浓缩到废料量的2倍,添加3倍量乙醇,醇沉时间为9h。虫草素水提液经过乙醇除杂后,杂质含量仍然很高,需要先对虫草素提取液进行初步分离。通过对6种阳离子交换树脂静态吸附虫草素的特性进行研究,最终选择JK006树脂用于虫草素的粗纯化。对阳离子树脂JK006进行热力学特征研究,研究结果表明,在温度298K-308 K和虫草素质量浓度范围内,吸附过程符合Freundlich吸附等温方程。热力学参数焓变△AH>0,自由能变△G<0,JK006树脂对虫草素的吸附是吸热过程,反应是自发进行的。影响阳离子树脂JK006动态吸附解吸的因素有流速、吸附液浓度、解吸液浓度等,吸附柱最佳工作条件:流速3 BV/h,吸附液浓度1.69 mg/mL。解吸液为0.25 mol/L的氨水,解吸流速2 BV/h。经过阳离子树脂JK006的初步纯化后,采用717阴离子树脂进一步纯化,得到纯度为96.4%虫草素晶体。用TLC法、HPLC法、紫外光谱、红外光谱等对获得的虫草素进行定性定量鉴定,确定其与标准品为同一种物质。以白血病细胞K562为阳性对照,研究了不同浓度的自制虫草素对小鼠肝癌H22细胞增殖的抑制作用。结果表明,虫草素对K562细胞和H22细胞具有明显的抑制作用,其抑制作用具有明显的剂量依赖性。IC50值比较,得出K562细胞对虫草素的敏感性比H22细胞强。
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