第一部分Sublytic C5b-9诱导GMCs合成Tsp-1、TGF-β₁及其促细胞增殖和ECM分泌的作用目的：探诗亚溶解剂量的补体C5b-9复合物（sublytic C5b-9）刺激肾小球系膜细胞（Glomerular mesangial cells，GMCs）上调血小板反应蛋白-1（Thrombospondin-1，Tsp-1）和转化生长因子-beta 1（Transforming growth factor-β₁，TGF-β₁）的基因表达，促进GMCs增殖与细胞外基质（Extracellular matrix，ECM）分泌的作用。阐明Tsp-1与TGF-β₁、GMCs增殖和ECM分泌之间的相关关系。方法：在确定sublytic C5b-9最佳浓度的基础上，将体外培养的GMCs作不同的分组处理。应用Real-time PCR和Western blotting分别检测不同处理的GMCs，其Tsp-1、TGF-β₁、细胞周期蛋白（cyclin D₂）和纤维连接蛋白（Fibronectin，FN）mRNA丰度和蛋白表达水平，另用ELISA法测定GMCs培养上清中活化的TGF-β₁的含量，并用³H-胸腺嘧啶核苷酸掺入量（³H-thymidine incorporation，³H-TdR）检查GMCs的增殖情况。此外，利用合成的Tsp-1封闭肽段（GGWSHW，抑制TGF-β₁的活化），观察Tsp-1在由sublytic C5b-9诱导TGF-β₁的合成、GMCs增殖与ECM分泌中的作用。结果：培养的GMCs在sublytic C5b-9复合物（5％anti-Thy 1 Ab和4％正常血清）刺激后18 h，其Tsp-1、TGF-β₁mRNA和蛋白表达水平明显上调，24 h时cyclin D₂、FN mRNA和蛋白的表达亦显著增加，同时GMCs呈现明显的增殖反应。而GGWSHW（Tsp-1的封闭肽）能显著减少由sublytic C5b-9诱导的TGF-β₁的合成，并且FN mRNA和蛋白的表达水平也明显下调，但其对GMCs增殖影响并不显著。结论：Sublytic C5b-9能够诱导GMCs合成Tsp-1、TGF-β₁，促进GMCs增殖和ECM分泌，其ECM的分泌可能与Tsp-1、TGF-β₁的合成有一定的关系。第二部分沉默Pi3-k／Akt基因对sublytic C5b-9促进GMCs合成Tsp-1，TGF-β₁及其细胞增殖和ECM分泌的影响目的：从基因水平上探讨沉默磷脂酰肌醇3-激酶（Pi3-k）／Akt基因对sublytic C5b-9诱导Tsp-1、TGF-β₁的合成，促进GMCs增殖和ECM分泌的影响。方法：根据Pi3-k／Akt靶基因序列的不同区域设计出了8对小干涉RNA（small interference RNA，siRNA）。体外将不同的Pi3-k／Akt发夹状RNA（small hairpin RNA，shRNA）转染入GMCs后，筛选干扰效率最佳的Pi3-k shRNA（shPi3-k）和Akt shRNA（shAkt），将GMCs作相应的分组处理。以Real-time PCR检测各组GMCs中Tsp-1、TGF-β₁、cyclin D₂和FN mRNA丰度，Western blotting检测磷酸化Akt（P^*-Akt），总Akt（T-Akt），Tsp-1，cyclin D₂和FN蛋白表达水平，另用ELISA法检测各组GMCs培养上清中TGF-β₁的含量。此外，用³H-TdR检查GMCs的增殖水平。结果：将8对shRNA质粒分别转染GMCs，发现，shPik3c3-2和shAkt1-4能明显减低GMCs中P^*-Akt和T-Akt的蛋白表达水平，而用shPik3c3-2、shAkt1-4、shPik3c3-2+shAkt1-4分别转染GMCs，再行sublytic C5b-9刺激，其Tsp-1、TGF-β₁、cyclin D₂、FN的mRNA和蛋白表达水平、GMCs增殖均明显下调，尤以shPik3c3-2、shPik3c3-2+shAkt1-4下调效果最为显著。结论：sublytic C5b-9诱导Tsp-1、TGF-β₁的合成，促进GMCs增殖和ECM分泌，其信号通路涉及Pi3-k／Akt分子的参与。