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芳香化酶参与哺乳动物中枢神经系统的发育，调节神经内分泌，影响性行为和繁殖功能；并且可以调控非哺乳动物性腺分化，影响多种鱼类的性别分化和性别决定。芳香化酶由芳香化酶基因cyp19a1编码，在尼罗罗非鱼中，存在两种芳香化酶基因，分别为性腺型芳香化酶基因(cyp19a1a)和脑型芳香化酶基因(cyp19a1b)，他们分别编码性腺型芳香化酶(P450aromA)和脑型芳香化酶(P450aromB)。其中性腺型芳香化酶主要在性腺中，在其它组织中很少表达甚至不表达。为了了解高温对尼罗罗非鱼性别分化相关基因表达的分子调控机制，本文通过RT-PCR技术获得尼罗罗非鱼cyp19a1a ORF区，并进行了原核表达，纯化了重组蛋白，免疫小鼠制备了多克隆抗体。对尼罗罗非鱼进行36℃高温处理，分析高温诱导前后尼罗罗非鱼性腺中cyp19a1a蛋白表达的变化情况。同时体外培养尼罗罗非鱼卵巢细胞，并对卵巢细胞进行高温处理，qRT-PCR分析离体情况下cyp19a1a以及hsp70的变化情况。1、从尼罗罗非鱼卵巢提取总RNA，反转录获得cDNA模板后，利用设计的引物PCR扩增cyp19a1a ORF区1200bp片段，将扩增得到目的片段进行双酶切并连接到pET-28a (＋)表达载体上，经酶切验证和DNA测序鉴定后证明成功构建了pET-28a-cyp19a1a原核表达载体。将表达载体转化到大肠杆菌BL21中，优化IPTG诱导浓度和诱导时间，结果显示在0.5mM/LIPTG诱导8h后cyp19a1a重组蛋白大量表达，并以包涵体形式存在。通过Ni2+-NTA层析柱和切胶纯化后获得与预期片段大小一致的表达蛋白，并用Western blotting验证了纯化的蛋白是目的蛋白。将纯化的pET-28a-cyp19a1a重组蛋白注入昆明白小鼠内并成功获得多克隆抗体。用Western blotting验证了多克隆抗体的有效性。用所得抗血清检测高温诱导前后尼罗罗非鱼性腺中cyp19a1a的表达变化情况，发现高温诱导后cyp19a1a的表达量显著降低。2、利用组织块贴壁法培养了尼罗罗非鱼卵巢细胞，结果显示尼罗罗非鱼卵巢细胞能在含15%FBS和5%鱼血清的L-15培养液及29℃的培养条件下正常生长并具有连续传代能力。同时，qRT-PCR分析37℃高温诱导下尼罗罗非鱼及体外培养卵巢细胞的hsp70和cyp19a1a基因的表达水平，结果显示，高温诱导能显著上调罗非鱼卵巢hsp70的表达量，而在体外培养的卵巢细胞中hsp70表达量也呈上升趋势但不显著，这说明体外尼罗罗非鱼卵巢细胞对热应激敏感；然而，高温诱导对尼罗罗非鱼卵巢细胞cyp19a1a的表达水平无显著影响，这暗示了高温对cyp19a1a表达水平的影响可能需要其它蛋白或其它性别相关基因（foxl2、sox9、dnmt1等）的协同作用。