神经生长因子通过PTEN基因抑制肝癌细胞增殖的机制

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本论文通过Sanger测序方法检验肝癌细胞系HepG2和HuH7中PTEN基因突变情况。结果显示,HepG2细胞中包含野生型PTEN基因序列,HuH7细胞中检测到PTEN基因发生突变,因此选择肝癌细胞系HepG2用于后续实验。利用Western Blotting检测肝癌细胞HepG2中PTEN蛋白和肝癌肿瘤标志物甲胎蛋白AFP的表达水平,结果显示两者的蛋白表达量呈负相关性。NGF是最早开始研究也是研究最清楚的神经营养因子,近年来实验研究表明,NGF参与到肿瘤生长、分化、血管形成以及转移的过程中,在肿瘤的发生与发展中发挥重要的作用。为了进一步探索NGF在肝癌细胞中的机制机理,本研究利用NGF处理野生型肝癌细胞HepG2和PTEN基因敲除的HepG2细胞,检测细胞增殖、凋亡以及周期变化。结果显示,NGF能够有效抑制野生型HepG2细胞的增殖,促进其凋亡并同时诱导细胞内G0/G1周期阻滞,对于PTEN基因敲除的HepG2细胞,NGF对其增殖、凋亡和周期没有显著性作用。为了进一步探索肝癌细胞中PTEN蛋白和AFP蛋白的负相关作用,使用EGF、ATRA和NGF分别处理HepG2细胞,qRT-PCR和Western Blotting结果显示,EGF不影响HepG2细胞中PTEN和AFP的表达;NGF和ATRA能够显著改变PTEN和AFP的表达。在此基础上,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得PTEN基因敲除的HepG2细胞,同时用NGF、PI3K 抑制剂 Wortmannin 和 Akt 抑制剂 Perifosine,qRT-PCR 和Western Blotting结果显示同时用NGF和Wortmannin处理HepG2细胞不改变HepG2中PTEN和AFP的表达;同时加入NGF和Perifosine只改变HepG2细胞中PTEN的表达,不改变AFP的表达;利用NGF处理PTEN基因敲除的HepG2细胞对AFP的表达不产生显著性改变。本研究通过探索肝癌细胞中PTEN基因的功能及作用机制,发现NGF会促进肝癌细胞HepG2中的PTEN的表达,抑制HepG2中AFP的表达,并且揭示该表达水平的改变与PI3K/Akt细胞通路有关,这一发现为肝癌的临床治疗手段提供了新的可探究路径。
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