枯草芽孢杆菌CS27高密度培养及保藏研究

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枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是我国农业部公布允许使用的15种微生态制剂菌种之一,已经越来越多的被研制成微生物制剂。其制剂是无毒、无污染的环保产品,具有广阔的发展前景,已经广泛应用于畜牧、水产养殖业、饲料行业,显示出巨大的经济、社会效益和生态效益。本课题以实验室前期筛选的枯草芽孢杆菌CS27为出发菌株,研制用于饲用的微生物菌剂。应用正交试验和响应面分析法对CS27摇瓶液体发酵的培养基进行优化,研究了CS27菌株在5L液体发酵罐中最优发酵条件,并对CS27菌剂保藏方法进行初步探讨。课题研究结果如下:(1)采用单因素试验和正交试验方法,对已筛选出的枯草芽孢杆菌CS27菌株进行液体培养基和工艺条件优化。确定了最佳培养基配方为:1.5%糖蜜、1.5%黄豆粉、0.5%氯化铵、1.0%NaCl、0.1%MgSO4·7H2O、0.1%柠檬酸钠、0.5%碳酸钙;最佳发酵条件为:发酵温度32℃,初始pH值7.0,最适接种量10%(v/v),最佳装液量50mL/250mL。(2)以枯草芽孢杆菌CS27为材料,利用Plackett-Burman设计法,对影响菌体生长的8个因素进行筛选,确定影响菌体生长的主要因素为黄豆粉、氯化铵、初始pH;采用响应面分析法对这3个重要因子的最佳水平进行研究。结果表明当黄豆粉浓度为1.7%,氯化铵浓度为0.17%,初始pH6.1,菌体生物量由1.34×109cfu/ml提高到1.55×109cfu/ml,提高了20%。(3)对5L发酵罐上枯草芽孢杆菌CS27的发酵工艺进行研究,确定最佳工艺条件:搅拌速度180r/min,pH6.5,溶氧量10%,最适培养时间21h,所获得的枯草芽孢杆菌CS27菌体生物量约为1.45×1010cfu/mL。(4)探讨用吸附剂吸附液体发酵细胞的固体菌剂的保藏方法。结果表明,吸附剂的效果依次为沸石>谷壳糠>白炭黑,当菌种液:沸石1:7吸附时固体菌剂保藏效果最好,菌剂保藏三个月细胞存活率最高为70.28%。
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