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中药材是我国重要的农产品之一。中药材的发展是几千年来中华民族智慧的结晶,为人类的健康做出了巨大的贡献。目前我国对中药材的质量标准常常仅限于鉴别外观、性状检查,很少对其中的有效成分进行检测。因此,中药材的质量控制成为其走向现代化和国际化的瓶颈。对于中药材中活性成分的定量分析,毛细管电泳法(CE)是较为常用的方法。CE具有分离效率高、分析速度快、样品用量少、应用范围广等优点,是分离科学中研究最为活跃的领域之一。但由于其灵敏度较低,从而限制了其在痕量物质分析中的应用,所以提高CE检测的灵敏度一直是人们密切关注的课题。采用在线富集技术是解决CE检测灵敏度低的一个简单且行之有效的途径。胶束溶剂堆积(MSS),是一种新型毛细管电泳在线富集技术,它能够应用于多种毛细管电泳分离模式,且能和其它在线富集技术联用。在系统查阅大量相关文献资料的基础上,进行了以下研究工作:(1)应用推扫和MSS两种在线富集技术,在毛细管区带电泳(CZE)模式下,建立了中药材中有机酸的测定新方法。本试验探讨了MSS对有机阴离子的富集过程。对富集和分离的影响因素进行了优化。最终确定最优条件为:BGS为50 mmol/L乙酸铵(p H 12.0)中含有50%甲醇(v/v);胶束溶液为12 mmol/L十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和20 mmol/L乙酸铵混合溶液;样品基质为20 mmol/L乙酸铵;分离电压为-20 k V;在最优条件下,测定了当归和胡黄连两种中药材的香草酸、阿魏酸和肉桂酸的含量,加标回收率在80.8%~119.6%之间。检出限(S/N=3)为0.03~0.06μg/m L。富集倍率为42倍至77倍。本方法准确、可靠,灵敏度得到提高,适合中药材中有机酸含量的分析测定。(2)建立了推扫-MSS-CZE法测定中药中士的宁和马钱子碱两种生物碱的新方法。本实验探索了富集的机理,对影响分离和富集效率的因素进行了优化。BGS为75 mmol/L磷酸(p H 2.5)和30%甲醇(v/v)混合溶液。检测波长为203 nm。结果表明,士的宁和马钱子碱在(0.1~5)μg/m L线性关系良好,线性相关系数分别为0.9998和0.9997,检出限(S/N=3)均低至0.01μg/m L,与常规CZE方法相比分别富集了51和38倍,二者加标回收率均在94.2%~105.4%之间。本方法分析时间短、灵敏度高、操作简单、对环境污染小,适合中药中士的宁和马钱子碱的检测。(3)应用推扫-MSS两种毛细管在线富集技术,建立了喹诺里西啶类生物碱(槐果碱、苦参碱和氧化苦参碱)的测定新方法。对分离和富集的影响因素进行了优化,最终确定最佳条件为:BGS为50 mmol/L乙酸铵(p H 8.5)中含有40%的甲醇(v/v);胶束溶液为15 mmol/L十二烷基硫酸钠(SDS)和10 mmol/L乙酸铵(p H 2.0)的混合溶液;样品基质为15 mmol/L乙酸铵(p H 2.0);0.5 psi下胶束溶液进样30 s,之后再进90 s样品;分离电压为20 k V;检测波长为200 nm。在最优条件下,与常规CZE相比三种生物碱富集了42倍至52倍。在(0.1~10.0)μg/m L之间,槐果碱、苦参碱和氧化苦参碱线性关系良好,线性回归系数为0.9992~0.9996,检出限(S/N=3)为(0.02~0.03)μg/m L。日内(n=8)和日间(n=5)精密度良好,相对标准偏差(RSDs)均低于9.5%。本方法准确可靠,中药样品中加标回收率为87.5%~109.0%。(4)本实验将场放大进样(FASI)和MSS两种在线富集技术联用,在毛细管区带电泳分离模式下对人尿样中三种中药材活性成分(小檗碱、巴马汀和药根碱)进行了分离和测定。槐果碱作为内标物,对影响分离和富集效果的因素进行了优化。最终确定条件为:背景缓冲溶液为75 mmol/L碳酸氢铵中含40%甲醇(v/v),胶束溶液为15 mmol/L碳酸氢铵和7 mmol/L的SDS混合溶液,样品基质为40%的甲醇水溶液。分离电压为20 k V;检测波长为260 nm。在最优条件下,此方法的富集倍率达到314倍至405倍。小檗碱,巴马汀和药根碱在(0.05~10.0)μg/m L范围内线性关系良好,线性相关系数为0.9992~0.9998。检出限(S/N=3)为(5~10)ng/m L。本方法的日内(n=6)和日间(n=4)精密度良好,RSDs均低于9.3%。实际尿样的加标回收率在85.2%至105.5%之间。该法具有简单快速、准确可靠、灵敏度高等优点。(5)应用FASI和MSS两步堆积,建立了人尿样中两种中药活性成分(士的宁和马钱子碱)的毛细管区带电泳测定新方法。对影响分离和富集的因素进行了优化,最终确定最优条件为:BGS为75 mmol/L乙酸铵中含20%甲醇(v/v);胶束溶液为15 mmol/L SDS与30 mmol/L乙酸铵;样品基质为60%甲醇水溶液;分离电压为20 k V;该方法士的宁和马钱子碱在(10~1000)ng/m L范围内线性关系良好,线性相关系数分别为0.9985和0.9945。与常规毛细管区带电泳相比,本方法的富集倍率达1590倍至1638倍,士的宁和马钱子碱的检出限(S/N=3)低至2.5和4.0 ng/m L,灵敏度得到很大提高。本方法简单、准确、可靠,适合应用于尿样中生物碱的测定。(6)应用MSS毛细管电泳在线富集技术,建立了苯海拉明、氯苯那敏、异丙嗪的测定方法。本实验对影响MSS富集效率的因素进行了优化。背景缓冲溶液:30mmol/L磷酸二氢钠(p H 7.5)和55%甲醇(v/v);样品溶液:10 mmol/L SDS和10mmol/L磷酸二氢钠(p H 2.5);0.5 psi下进样60 s;检测波长为200 nm。结果表明,苯海拉明、氯苯那敏、异丙嗪在0.6~60.0μg/m L浓度范围内线性关系良好,线性相关系数分别为0.9996、0.9996和0.9971,检出限(S/N=3)分别低至0.1μg/m L、0.2μg/m L和0.2μg/m L。三者的加标回收率分别为92.5%~107.2%、89.7%~102.7%和100.7%~108.0%。日内和日间精密度较好,RSDs均小于9.1%。与常规毛细管区带电泳相比,本方法对三种待测物的富集倍数为43倍至111倍。本文方法快速、简便、准确度好,弥补了毛细管电泳测定痕量组分的不足,为人体内生物样品中药物的痕量分析提供了新的方法。