水飞蓟宾通过Wnt/β-catenin信号通路对酒精性肝纤维化模型大鼠的保护作用机制的实验研究

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目的研究水飞蓟宾对酒精性肝纤维化(ALF)模型大鼠的保护作用,并从抗氧化应激、改善肝功能、逆转肝纤维化的程度及对Wnt/β-catenin信号通路的影响来探讨水飞蓟宾胶囊的肝脏保护作用的可能作用机制。方法取100只健康SD雄性大鼠,其中15只作为正常对照组,其余大鼠采用灌胃乙醇混合液的方法复制酒精肝纤维化模型,将模型成功大鼠随机分为模型组、水飞蓟宾高剂量组(75.6mg/kg)、中剂量组(37.8mg/kg)、低剂量组(18.9mg/kg)、阳性药组(秋水仙碱,0.27mg/kg),每组10只。各给药组按剂量灌胃给药4周,末次给药后取血、分离血清,并取肝脏。HE染色观察各组大鼠肝组织形态学改变,Masson染色观察各组大鼠肝纤维化程度;生化法检测各组大鼠血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)的含量;酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组大鼠血清HA、LN、Hyp的含量及肝组织PCⅢ、Ⅳ-C、SOD、MDA、TGF-β1、TIMP-1的水平;免疫组织化学染色法检测各组大鼠肝组织α-SMA的表达;Western blotting检测各组大鼠肝组织Wnt、β-catenin、MMP-7蛋白的表达。结果1.HE染色观察病理学特征,正常组大鼠肝组织和肝细胞清晰可见,无细胞变性和坏死现象。模型组大鼠肝细胞出现脂肪变性、坏死等现象,组织结构被严重破坏,肝索排列不整齐,同时可见炎细胞浸润于汇管区和中央静脉,纤维组织异常增生,延伸至小叶内形成假小叶。与模型组比较,各用药组大鼠肝细胞的脂肪变性、水肿、坏死程度明显减轻,组织破坏程度得到很大改善,纤维组织增生明显减少。2.Masson染色观察可见,正常组大鼠肝组织中汇管区内几乎无胶原沉积。而模型组大鼠的汇管区、中央静脉及肝实质内有大量明显增生的纤维组织和胶原沉积,并形成假小叶,说明肝纤维化形成。与模型组比较,各用药组胶原沉积明显减少。3.与正常组大鼠比较,模型组大鼠血清AST、ALT、HA、LN、Hyp含量增加明显(P<0.01),肝组织Wnt、β-catenin、MMP-7蛋白的表达量显著上升(P<0.01)。与模型组大鼠比较,水飞蓟宾胶囊能够明显降低血清AST、ALT、HA、LN、Hyp水平(P<0.05或P<0.01),降低肝组织Wnt、β-catenin、MMP-7蛋白的表达量(P<0.05或P<0.01)。4.与正常组大鼠比较,模型组大鼠肝组织PCⅢ、Ⅳ-C、MDA、TGF-β1、TIMP-1含量明显上升(P<0.01),SOD水平明显下降(P<0.01),与模型组大鼠比较,水飞蓟宾胶囊能够显著降低肝组织PCⅢ、Ⅳ-C、MDA、TGF-β1、TIMP-1的含量(P<0.05或P<0.01),提高肝组织SOD含量(P<0.01)。5.与正常组大鼠的肝组织比较,模型组大鼠α-SMA的蛋白表达明显增加(P<0.01);与模型组大鼠相比,各用药组大鼠肝组织α-SMA表达显著下降(P<0.01)。结论1.水飞蓟宾胶囊能减轻ALF肝组织的病理改变,可有效降低血清AST、ALT、HA、LN、Hyp的含量。2.水飞蓟宾胶囊可有效降低MDA含量同时升高了SOD的活性,提示水飞蓟宾可以通过发挥抗氧化作用达到对ALF肝损害的保护。3.水飞蓟宾胶囊可以明显降低肝组织PCⅢ、Ⅳ-C、TGF-β1、TIMP-1的含量及α-SMA的表达,并减少肝组织中Wnt、β-catenin、MMP-7蛋白的表达量,有效改善酒精肝纤维化的程度,提示水飞蓟宾胶囊可能是通过Wnt/β-catenin信号通路实现对ALF肝损害的保护作用。
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