目的:建立体外培养大鼠颅底软骨细胞的方法,并进行体外周期性张应变（Cyclic tensile strain,CTS）加载,研究CTS对颅底软骨细胞合成胞外基质的影响及CTS加载后miRNA的表达差异。方法:采用两步酶消化法分离培养1周龄SD大鼠颅底软骨细胞,采用SABC法检测Ⅱ型胶原及Sox9的表达来鉴定软骨细胞,定量分析传代过程中Sox9、Col1a1、Col2a1、Col10a1 mRNA的表达变化及COL2A1、SOX9蛋白的表达变化。采用FX-5000^TM细胞张应力加载系统对P2代软骨细胞施加1Hz、10%延伸率、sin波形的CTS,加力时间为24h。对照组在同一时间静置培养于细胞加力板。定量分析加力组与对照组内有关基因的表达差异及COL2A1、SOX9蛋白的表达差异。使用Illumina公司的HiSeq^TM 2000对加力组及对照组颅底软骨细胞进行miRNA深度测序,包括cDNA文库制备、簇生成、上机测序3个主要步骤,通过数据分析获得差异表达的miRNA。结果:体外培养的颅底软骨细胞4代以内II型胶原及Sox9的免疫组化均呈强阳性;Col2a1及Sox9的表达在P1代降低、P2代回升,并在P3、P4代维持稳定;Col1a1至P3代开始大幅上升;COL2A1及SOX9蛋白在P0及P4代细胞中均有表达,P1代细胞表达量略低于P2代细胞。P2代颅底软骨细胞加力后,Acan、Col2a1及Col10a1的表达均较对照组升高（P<0.05）,Sox9和Ihh的表达较对照组升高（P<0.05）,PTHrP的表达基本没有变化（P>0.05）。COL2A1和SOX9蛋白的表达均较对照组升高。深度测序结果获得24条差异表达的miRNA（P<0.05）,其中14条表达下调,10条表达上调,miR-140-5p和miR-125b-5p是两条最有可能起作用的miRNA。结论:本研究成功分离和培养了颅底软骨细胞,P2、P3、P4代细胞均可用于后续实验,以P2代最佳。1Hz、10%延伸率的CTS有促进颅底软骨细胞合成软骨性基质的作用,miR-140-5p和miR-125b-5p是两条最有可能起作用的miRNA。