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鸭疫里氏杆菌病是由鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer, RA)引起的目前严重危害养鸭业的重要接触性传染病之一,特征是败血性渗出,临床剖检症状主要表现为全身浆膜炎性渗出。该病呈世界范围分布,给世界各国的养鸭业造成了重大的经济损失。目前把RA分为21个血清型,因为血清型众多,而各个血清型之间缺乏有效的交叉保护,使用疫苗免疫预防该病困难重重,一旦感染此病,将给鸭场带来难以估量的损失,因此我们迫切需要安全有效的疫苗来防治此病。使用分子生物学手段,研究鸭疫里氏杆菌的致病和免疫机制,对预防该病具有重大意义。本研究以血清1型鸭疫里氏杆菌云梦株(RA-YM)为亲本株,通过构建重组自杀性质粒,采用结合转移方法构建了RA-YM株的aroA基因缺失株,为后续研究鸭疫里氏杆菌aroA基因的功能奠定基础。同时,对本实验室已构建的鸭疫里氏杆菌DPPⅣ缺失株的生物学特性进行了研究。取得的主要研究结果如下：1鸭疫里氏杆菌DPP Ⅳ缺失株的生物学特性研究经生化鉴定,鸭疫里氏杆菌DPP Ⅳ缺失株和亲本株的生化特性并无变化。将鸭疫里氏杆菌DPP Ⅳ缺失株和亲本株在TSB培养基中培养,测定其生长曲线,结果发现缺失株的生长速度比亲本株慢。对8日龄雏鸭攻毒,鸭疫里氏杆菌缺失株的LDso为1.0×108CFU,亲本株的LD50为3.6×106CFU,缺失株的毒力比亲本株下降了约28倍。通过缺失株和亲本株对Vero细胞粘附入侵能力的研究,结果表明缺失株的粘附入侵能力明显低于亲本株。上述结果表明DPPⅣ基因是鸭疫里氏杆菌的一个重要毒力基因,为进一步研究DPP Ⅳ基因在细菌致病中的作用奠定基础。2鸭疫里氏杆菌aroA基因缺失株的构建参照GenBank中RA-YM株的aroA基因序列,以RA-YM株的基因组为模板,采用PCR法扩增aroA基因的左右同源臂序列,在左右同源臂序列中间插入壮观霉素抗性基因序列(含启动子),连接到自杀性质粒pRE112上,构建了重组自杀性质粒pRE112-LSR,将构建好的重组自杀性质粒转化E.coli X7213,以RA-YM株为受体菌,含有重组自杀性质粒的E.coli X7213为供体菌,供体菌和受体菌进行结合转移,涂布含有壮观霉素抗性的TSA平板上,挑取平板上的菌落,用PCR法鉴定同源臂发生了交换,构建了鸭疫里氏杆菌aroA基因缺失株,为进一步研究aroA基因的功能奠定基础。