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目的:观察瘦素对脂质变性人肝L-02细胞甘油三酯含量、脂肪酸β氧化及瘦素受体、肉碱转移酶ImRNA表达的影响,探讨肝细胞脂质变性的发生机制及瘦素对其的防治作用。 方法:采用随机对照研究,以离体人肝L-02细胞为研究对象。用10％(V/V)医用脂肪乳注射液和10%(V/V)胎牛血清的RPMI-1640完全培养基孵育人肝L-02细胞24小时,制备肝细胞脂肪变性模型。后分别加入重组人瘦素(10-5mol/l,10-6mol/l,10-7mol/l)孵育24小时,油红O染色观察细胞形态和细胞内脂滴的形成情况,高效液相色谱法检测细胞内甘油三酯的含量,半定量RT-PCR法检测瘦素受体和肉碱转移酶I的mRNA表达。从而确定瘦素改善细胞脂肪变性的最佳浓度,作出量效关系。然后以瘦素最佳浓度分别孵育模型组细胞0h,12h,24h,48h,使用上述观察方法,从而确定瘦素改善细胞脂肪变性的最佳时间,作出时效关系。实验数据以x±s表示,用SPSS11.0统计软件对数据进行分析,以P<0.05作为差异显著性标准。 结果:用脂肪乳注射液孵育人肝L-02细胞24小时后,油红O染色符合肝细胞小泡性脂肪变性特征;HPLC测定细胞内总甘油三酯含量明显增高,与正常组比较有显著性差异,成功的制备肝细胞脂肪变性模型。加入瘦素(10-5mol/l,10-6mol/l,10-7mol/l)孵育24小时后,油红O染色胞浆内脂滴与模型组比较明显减低;HPLC结果发现:细胞内总甘油三酯含量随瘦素剂量的增高而降低。以瘦素(10-6mol/l)浓度为最佳处理浓度,分别孵育模型组细胞0h,12h,24h,48h后,HPLC结果发现:细胞内总甘油三酯含量随瘦素处理时间的延长呈时间依赖性降低。半定量RT-PCR法检测各组细胞的CPT-1和OB-Rb的mRNA水平。结果显示,瘦素处理组较正常组及模型组相比,CPT-1的mRNA表达明显上升,有统计学意义。瘦素(10-5mol/l)处理组和模型组OB-Rb的mRNA表达较正常组明显下降,有统计学意义。 结论:1.肝细胞脂肪变性,予以瘦素干预,能促进肝细胞内CPT-1的mRNA表达,减少细胞内甘油三酯含量。2.肝细胞脂肪变性,OB-Rb的mRNA表达较正常组明显下降。3.瘦素处理组随着肝细胞脂肪变性减轻,OB-Rb的mRNA表达得以改善,且高浓度瘦素处理,OB-Rb的mRNA表达较其他瘦素处理组明显减少。