补阳还五汤对实验性自身免疫性脑脊髓炎单核巨噬细胞的免疫调控研究

来源 :山西中医药大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:youare2b2
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目的:本课题以雌性C57BL/6小鼠为对象,应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽(myelin oligodendrocyte glycoprotein peptides,MOG35-55)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型进行制备,运用补阳还五汤(Buyang Huanwu decoction,BYHWD)灌胃进行干预,观察对照组和治疗组的临床症状、病理变化及BYHWD对小鼠中枢神经系统(central nervous system,CNS)脊髓、外周免疫系统脾脏单核巨噬细胞的影响。探讨BYHWD治疗EAE的有效性及对单核巨噬细胞免疫调控的作用及机制。方法:雌性C57BL/6小鼠42只,用小鼠MOG35-55多肽免疫制备成EAE的模型,按照随机数字分配表将小鼠分为EAE对照组、BYHWD治疗组,每个组各有21只动物。在免疫后的第3天开始进行灌胃给药,EAE对照组予以自来水、BYHWD治疗组给予BYHWD,500μl/只/d(含原药1g),持续观察临床症状和体重变化。免疫后17天(p.i.17)各组统一处死9只动物,无菌分离脾脏,5只用于制备脾脏单个核细胞混悬液,流式细胞术(Flow CytoMetry,FCM)检测脾脏单核巨噬细胞M1型和M2型细胞亚型;4只脾脏经脱水后制成冰冻切片进行免疫荧光组织化学染色,检测iNOS、Arginase-1的表达。脊髓冰冻切片进行HE染色观察炎性细胞浸润情况,罗氏染色观察脊髓髓鞘脱失比例,免疫荧光组织化学染色、Western blot法检测脊髓巨噬细胞iNOS、TNF-α、Arginase-1及IL-10的表达。运用统计分析软件Graphpad Prism 6.0对实验结果进行分析处理。结果:1.C57BL/6小鼠由MOG35-55抗原乳剂免疫诱导后EAE小鼠模型成功建立。从平均起病时间来看,BYHWD组较EAE对照组而言,起病时间明显推迟,临床症状评分明显降低;同时,BYHWD治疗组可明显抑制EAE小鼠在发病期间的体重减轻(p<0.01)。2.BYHWD治疗后可减轻EAE小鼠脊髓的髓鞘脱失程度(p<0.05)。3.HE染色和免疫荧光组织化学染色观察到EAE脊髓有不同程度的炎性细胞浸润。BYHWD可以减轻CNS CD68+单核巨噬细胞及炎性细胞的浸润(p<0.05)。4.EAE小鼠经BYHWD治疗后,可显著抑制脊髓及脾组织中巨噬细胞iNOS、TNF-α、CD16/32的表达,同时促进Arg-1、IL-10、CD206的表达(p<0.05)。结论:1.BYHWD对EAE具有较好的治疗效果,可以延缓EAE的发病程度,减轻EAE小鼠精神萎靡、食欲不振、四肢痿弱甚至瘫痪等中医“痿症”的临床症状。2.BYHWD可减轻EAE髓鞘脱失,抑制炎性细胞浸润,促进髓鞘再生。3.BYHWD促进EAE脊髓及脾组织中M1型巨噬细胞转化为M2型。其疗效机制可能与其抗炎、诱导巨噬细胞极性转化相关。
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