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目的:研究戊糖多硫酸钠(PPS)通过调控p38MAPK信号通道干预高糖对肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的分子机制。方法:(1)利用含不同浓度(5.5mmol/L、15 mmol/L、25 mmol/L、30mmol/L)葡萄糖的培养基刺激肾小管上皮细胞(HK-2)48h,再用不用浓度(50μμg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL)戊糖多硫酸钠预处理后的HK-2细胞给予30 mmol/L糖浓度的刺激,应用CCK-8比色法检测HK-2细胞生长的改变情况。(2)利用30mmol/L葡萄糖浓度的培养基分别刺激HK-2细胞Oh、2h、6h、12h、24h、48h,提取蛋白后通过Western Blot结果分析p38MAPK通道的磷酸化水平。(3)根据刺激条件和是否加PPS的不同将HK-2细胞分为低糖组(NG组)、低糖加药组(NG+PPS组)、高糖组(HG组)、高糖加药组(HG+PPS组),提取蛋白后通过Western Blot结果分析p38MAPK通路的磷酸化水平。(4)根据刺激条件和加药种类的不同将HK-2细胞分为低糖组(NG组)、低糖加PPS组(NG+PPS组)、低糖加P38抑制剂SB203580组(NG+SB203580组)、高糖组(HG组)、高糖加PPS组(HG+PPS组)、高糖加SB203580组(HG+SB203580组),提取蛋白后通过Western Blot结果分析细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved-caspse-3、caspse-3的表达水平,流式细胞技术检测细胞凋亡情况。(5)将高糖培养基培养的HK-2细胞分为高糖加PPS组(HG+PPS组)、高糖加SB203580组(HG+SB203580 组)和高糖加 PPS 加 SB203580 组(HG+PPS+SB203580 组),提取蛋白后通过Western Blot结果分析细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved-caspse-3、caspse-3的表达水平。(6)根据刺激条件和是否加PPS的不同将HK-2细胞分为低糖组(NG组)、低糖加药组(NG+PPS组)、高糖组(HG组)、高糖加药组(HG+PPS组),提取蛋白后通过WestemBlot结果分析炎症因子NF-kkBp65活化水平,用ELISA的方法检测对炎症因子TNF-a、ILl-β及IL-6的影响。结果:(1)用不同浓度的糖(5.5-30mmol/L)刺激HK-2细胞后发现,30mmol/L的糖与5mmol/L的糖相比,高糖(30mmol/L)能显著抑制细胞增殖。30mmol/L高糖培养基刺激HK-2细胞6h后,可见p38MAPK信号通路活化,且该通路的活化程度随着时间的增加而提高,高糖刺激HK-2细胞48h后p38MAPK通路的磷酸化最明显。高糖刺激HK-2细胞48h后出现明显细胞凋亡,Western blot检测发现表达Bax显著增强而表达Bcl-2明显减弱,Bax/Bcl-2比例升高,caspase-3活化成cleavedcaspase-3明显增加。(2)戊糖多硫酸钠处理高糖刺激后的HK-2细胞后发现,HK-2细胞凋亡明显减少,p38MAPK磷酸化水平明显降低,Western blot检测发现表达Bax显著减弱而表达Bcl-2明显增加,Bax/Bcl-2比例降低,cleavedcaspase-3明显减少。(3)戊糖多硫酸钠和p38MAPK通道抑制剂SB203580均能有效抑制高糖刺激的HK-2细胞的凋亡,但二者联合使用无明显增强效果。(4)戊糖多硫酸钠处理高糖刺激后的HK-2细胞后发现,炎症相关蛋白NF-kkBp65活化水平明显降低,炎症因子TNF-a、ILl-β及IL-6表达减少。结论:戊糖多硫酸钠可通过抑制p38MAPK通路的活化减轻高糖刺激HK-2细胞凋亡和炎症反应。