该文第1章建立了一种新的快速检测和初步鉴定苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)vip3A基因的方法,即采用PCR初步检测、菌株培养液上清总蛋白的SDS-PAGE分析、以及菌株培养上清液对敏感昆虫的毒力测定来准确检测Bt中的vip3A基因.Vip3A蛋白是苏云金芽孢杆菌在营养期分泌的一类新型杀虫蛋白,分子量约为88KDa.在检测的15个Bt菌株中,有lO株在PCR检测中扩增出大小一致的特异条带,且所得到的特异性片段与所预期的结果一致.说明此引物可以作为检测Bt中vip3A基因的特异引物.进一步进行上清蛋白的SDS-PAGE分析,显示出:大部分PCR呈阳性的菌株的上清蛋白中都含有分子量为88KDa大小的蛋白条带,而PCR呈阴性的菌株中则没有检测到此蛋白条带.说明PCR检测结果的准确性,但其中有1株PCR阳性菌株(L16)在其上清蛋白的SDS-PAGE检测中没有出现88KDa的条带,推测可能与菌株本身的性质有关.SDS-PAGE检测呈阳性的菌株,其上清液对敏感昆虫甜菜夜蛾和棉铃虫的初孵幼虫均有致死作用,而阴性菌株对这2种供试昆虫无毒,同时高温加热后的上清液对供试昆虫也无毒.这说明上清蛋白含有一种对夜蛾科有高毒力和热不稳定性的蛋白,这与Vip3A蛋白的性质一致,从而确立了这种检测和鉴定方法的可行性.该文第2章在vip3A基因检测的基础上,选择本室分离的对夜蛾科高毒力的野生型菌株WY-197,用全长PCR的方法从中克隆了2.3kb大小的vip3A基因,序列分析表明:该基因全长2370bp,编码790个氨基酸;其蛋白质与已知的Vip3A氨基酸的同源性均在99％以上,vip3A-WYl97与vip3A(a)有4个核苷酸不同及三个氨基酸不同(K284→Q,A466→T, E762→K),与其它四个Vip3A蛋白相比也只有几个位点的氨基酸不同.然而vip3A基因的原核表达产物的SDS-PAGE没有检测到有相应的目的蛋白带,这可能与诱导条件有关,并且表达产物在对甜菜夜蛾和棉铃虫的生物测定中没有表现出杀虫毒力,只是对2种幼虫的生长具有明显的抑制作用.