子宫内膜异位症(EMs)是妇科常见病，在育龄妇女中的发病率为10-15％，在不育妇女中占20-40％，而且其发病率有逐步上升的趋势。迄今为止，子宫内膜异位症的病因和发病机理尚不清楚。近年来研究发现，子宫内膜异位症和糖尿病及哮喘一样，是一种多基因遗传病，其发病是在多基因共同作用的基础上，由某些环境因素诱导所致。因此，个体的遗传易感性是内异症发病的危险因素之一。 近年来有研究报道，某些毒物代谢酶基因如半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(GALT)，谷胱甘肽S-转移酶M1(GSTM1)和N-乙酰转移酶2(NAT2)基因的遗传多态性与子宫内膜异位症遗传易感性相关。Baranova等报道GSTM1基因的杂合性丢失和NAT2的特定等位基因和基因型可增加个体对子宫内膜异位症的易感性。Cramer等在1996年首次报道GALT基因N314D多态与子宫内膜异位症的发病在一组北美人群中有明显相关性，但Morland，stefaasson，Hatfield等在其它人种均未得出相同的结论，提示GALT基因N314D多态与内 浙江大学硕士学位论文异症的关系值得进一步研究。 GALT基因位于染色体 9P2，编码毒物代谢酶一半乳糖上－磷酸尿昔酚转移酶，催化 l－磷酸半乳糖和 UDPG为 UDP．半乳糖和 1．磷酸葡萄糖，参与葡萄糖的能量代谢。GALT基因某些位点的多态变化可导致酶活性下降，从而引起半乳糖血症。有研究发现 N3 4D多态引起的酶活性减少与不育症k巢早衰及苗勒氏管发育异常有关，因此，Cramer等推测 GALT基因 N31 4D多态与内异症发病相关可能是苗勒氏管发育异常增加了经血逆流的机会所致，并进一步提示GALT基因 N31 4D多态引起的酶活性减少可能是内异症的一个发病因素。Jiang等通过微卫星分析发现在染色体 9P2区域伯 GALT基因所在地）存在一个未知的等位基因，它的杂合性丢失与子宫内膜异位的发病有关，认为GALT基因多态可能与内异症的易感位点存在连锁不平衡。 因此，我们采用PCR－RFLP的方法，通过检测并比较96例内异症思者和 8 8例非内异症的妇女 GALT基因 N3 4D和另一个引起半乳糖血症的常见多态位点Q188R的突变率，以探讨汉族妇女中GALT基因这二个位点的多态性分布及其与子宫内膜异位症发病之间是否存在相关性。 材料与方法1．研究对象 内异症患者 96例，为 2000年 1月一 2002年 12月在浙江大学医 一3一 浙江大学硕士学位论文学院附属妇产科医院经腹腔镜或开腹手术证实的住院病人。平均年龄38岁 幢3—45岁人 按美国生育协会修正标准分期：其中I刁期14例，Ill一N期 82例。对照组共 86例，为同期因异位妊娠（41例），小型子宫肌瘤门5例）及输卵管吻合术门 例）在浙江大学医学院附属妇产科医院经腹腔镜或开腹手术证实的非子宫内膜异位症妇女，平均年龄36岁仪260卜两组均为无血缘关系的浙江籍汉族妇女，无遗传病家族史。2．方法2＊基因组DNA的制备：两组人群均在麻醉前抽取外周抗凝静脉血Zml，分离淋巴细胞后参照OIAGEN公司提供的OIAamo Mimi Kit试剂盒的说明书提取基因组DNA。2．2 PCR反应：用 PCR－yLP技术，根据文献所报道的序列设计两对引物，扩增 GAL基因内含有的 Q188R和 N314D两个多态位点的外显于6和外显子10。弓物l（上游）5乙GGGTCGACGTCG叽G“ACGCTGCCACTCA－3’（下游）5乙GGGGACACAGGGCTTGGCTCTCTCCCA上’弓物2（上游）5乙GGGTC以CGAMGCTGG“CT阶GGGTGGAGCA－3’ 一4一 浙江大学硕士学位论文（下游）5’－GGGGTCGACGCCTGCAC附CTGC盯GTGA－3’ PCR反应体系：反应总体积50 ul，包括10XPCRBuffersul，MpCI。25 mM 5 ul，10 mM dNTP，四条引物各 5 pmol，基因组DNA 200 ng，TaqDNA聚合酶 2．5 U。扩增参数为：94oC预变性 8分钟，65℃退火1分钟，72℃延伸1分钟，36个循环后续以72oC延伸10分钟。所得 PCR产物分别为 637bq和 430hp的 DN A片段。2．3 Q188R、N314D多态性分析 向 PCR产物中加入 Hpa 11和 Sin两种限制性内切酶，37OC水浴12小时，所得酶切产物经 2％琼脂糖凝胶电泳分离，根据产物的大小判断每例样本的基因型。3．统计学方法 用直接计数计算两组GALT各等位基因和基因型频率的分布，并对其分布进行Hardy似einberg平衡检验。用／检验的方法对两组间等位基因及基因型频率进行比较。数据均用 SPSS 10刀统计软件处理。 结 果 1．对两组中GALT基因的基因型频率分别进行Hardy－Weinberg平衡检验，结果示P＞0刀5，表明在所选群体中GALT基因己达遗传平衡。 一5一 浙江大学硕士学位论文 2．在病例组和对照组中均末发现Q