中国马铃薯S病毒安第斯和普通株系的Rt-PCR分型及分子和病理学鉴定

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马铃薯(Solanum tuberosumL.)是仅次于水稻、小麦和玉米的世界第四大粮食作物,中国是世界最大的马铃薯种植和生产国,但是各种马铃薯病毒病一直严重制约着马铃薯产业的发展。马铃薯S病毒(Potato virus S, PVS)是世界范围的侵染马铃薯的常见病毒之一,在对我国湖北地区马铃薯进行病毒检测中发现,PVS是发生频率最高的病毒,因此本研究开展了对PVS分子和病理学特征的分析。  本研究根据已报道的PVS全长基因组序列,以PVS外壳蛋白(CP)和ORF1为目标区域,分别设计了株系特异引物,用以鉴别PVS两个典型的株系——普通株系和安第斯株系(即PVSO和PVSA)。以这些株系特异性引物进行RT-PCR分析,可以成功的区分PVSO和PVSA两种株系。通过对这些引物的PCR扩增产物测序比对分析,证实了这些引物的特异性和PCR分型结果的准确性。在上述RT-PCR方法鉴定获得的PVSO和PVSA株系分离物中各挑选一个典型的代表,分别命名为PVSHB24和PVSHB7,用于后续分子及生物学特征的鉴定。经过克隆和测序,获得了PVS HB24和HB7两个代表分离物8,453 bp的全长基因组序列,它们均含有6个开放阅读框,两个株系分离物的全长基因组序列核苷酸同源性为79.5%。基于全长基因组序列和CP基因的聚类分析均显示PVS HB24和PVS HB7分别聚类于PVSO和PVSA分支,属于这两种株系的典型代表。将两个分离物通过机械伤害分别接种藜麦(Chenopodium quinoa),PVS HB24会引起接种叶局部失绿坏死症状,但在植株的上部非接种叶无明显症状;而PVS HB7既可以诱导接种叶出现局部失绿坏死,在非接种叶也可以导致花叶症状。ELISA和RT-PCR检测也证明PVS HB7可以系统侵染藜麦,而PVS HB24则不能。将两分离物接种其他茄科寄主植物发现,它们都能侵染野生马铃薯Solanum chacoense和栽培马铃薯Solanum tuberosum cv.Shepody,并且均不表现明显症状;但两个分离物都不能侵染烟草Nicotiana occidentalis和N.tobaccum cv.Samsun。  本研究首次报道了中国PVS病毒的株系状况,克隆了第一个中国PVSA株系分离物,并分析鉴定了其分子和病理特性。同时,本研究建立了以PCR为基础的PVS分型体系,为PVS的株系分型鉴定提供新的技术手段,与生物学(指示植物)和血清学的方法相比,该方法大大减少了分析时间,提高了分型鉴定的准确性。
其他文献
本试验以目前生产上河北省栽培涩柿品种“磨盘柿”和“莲花柿”为试材,探索涩柿果实生长发育及成熟过程中内源激素、单宁物质、果胶酶、有机酸、可溶性糖及活性氧代谢等物质
马铃薯(Solanum tuberosum)是全球仅次于水稻、玉米和小麦的第四大主要粮食作物。马铃薯在种植的过程中会受到多种病虫害的危害,其中由致病卵菌(Phytoph-thora infestans)引