酿酒酵母β-D-葡聚糖制备、构象及免疫功效研究

来源 :江南大学 | 被引量 : 17次 | 上传用户:deeyf
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
β-D-葡聚糖存在于许多细菌、真菌和高等植物中,它的一个重要来源是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞壁。大量研究表明酵母β-D-葡聚糖可以通过激活巨噬细胞以起到抗肿瘤、抗菌、愈合伤口、抗氧化和降血脂等功效。此外,酵母β-D-葡聚糖在食品工业中被广泛用作于增稠剂、乳化稳定剂和脂肪替代品。目前国际上还没有酵母β-D-葡聚糖的标准测定方法。常规酵母β-D-葡聚糖的测定一般采用苯酚-硫酸法,测定结果误差较大。在此,本研究建立了一个酵母β-D-葡聚糖测定的新方法:首先利用涡流微珠破壁法对酵母细胞进行破壁,酵母细胞破壁率可达到95.28%;接着采用高浓度酸预处理结合常规酸水解方法对酵母β-D-葡聚糖进行酸水解,酵母β-D-葡聚糖的酸解回收率高达98.76%;在此基础上,由GOPOD法测定出β-D-葡聚糖的含量。新方法的相对标准差和加样回收率分别为0.46%和99.96%。采用新方法对不同酿酒酵母菌种的β-D-葡聚糖含量进行了分析对比,结果表明酵母中β-D-葡聚糖含量随其菌种不同而有明显差异(P≤0.05),占细胞壁干重比率的最大差异为138.10%,而占细胞干重比率的最大差异高达189.52%。接下来对酿酒酵母的发酵条件进行了优化。首先进行了单因素实验的研究,并在此基础上,以二次正交旋转组合设计试验,得到培养基模型方程为: Y = 106.89+3.74X1-8.85X12-5.72X22-7.96X32-7.52X42,经二次多项式逐步回归分析确定了最佳培养基(/100ml)为:葡萄糖3.27 g、蛋白胨(2)1.89 g、酵母膏1.57 g和甘油1.04 g。经过培养基的优化后,酵母β-D-葡聚糖产量由原来的65.80 mg/100ml提高到109.33 mg/100ml。然后,采用正交优化方法进行发酵条件优化,确定主次影响因素依次为:装液量>温度>起始pH>接种量,最适培养条件为:pH5.0、接种量5ml/100ml、温度32℃、装液量60 ml/瓶,经试验验证β-D-葡聚糖量达到128.30 mg/100ml,较发酵条件优化前提高了17.35%。在发酵条件优化基础上,以Logistic、BoxLucas1和SRichards2三种模型对酵母菌生物量和β-D-葡聚糖生成量进行非线性拟合,确定生物量模型以Logistic模型拟合效果最佳,拟合方程:相关系数可以达到0.975,而在β-D-葡聚糖生成模型拟合中,以SRichards2模型最佳,拟合方程:相关系数为0.996;在对基质(葡萄糖)的消耗拟合中,采用Exponemtial ExpDec1模型,拟合方程:相关系数为0.977。传统酵母β-D-葡聚糖的制备主要采用酸碱法,这易使β-D-葡聚糖发生氧化降解,致使得率偏低,并且会对β-D-葡聚糖的天然构象部分地破坏而使其生理活性受到严重的影响。基于此,本文建立一个由酿酒酵母中分离提取β-D-葡聚糖的新方法,此方法是在较为温和的条件下进行的,包括酵母的诱导自溶、高温和有机溶剂的抽提、均质破壁、生物酶解等步骤。新方法制备的β-D-葡聚糖纯度高达93%,得率为酵母细胞干重的11%。酵母β-D-葡聚糖不溶性制约其在工业中的应用,本研究采用超声修饰和均相硫酸酯化技术对酵母β-D-葡聚糖进行修饰改性研究。以400W的功率对酵母β-D-葡聚糖进行超声处理,每循环处理时间24s,间歇时间6s,共20个循环,酵母β-D-葡聚糖的平均粒径由起始的56.49μm降到2.33μm;在Urea-DMSO的均相体系中,以硫酸为酯化剂,对酵母β-D-葡聚糖进行均相硫酸酯化反应,硫酸浓度5%,100℃下反应4 h,最终酯化β-D-葡聚糖的取代度和得率分别为0.43和87.97%。采用了FTIR、EA和NMR等方法对酵母β-D-葡聚糖及其硫酸酯的基本结构进行分析,确定酵母β-D-葡聚糖以β-(1,3)为主链,其中新方法制备β-D-葡聚糖以β-(1,3)为主链每九个单元与一分子葡萄糖通过β-(1,6)键连接,而酸碱法制备β-D-葡聚糖以β-(1,3)为主链每五个单元与一分子葡萄糖通过β-(1,6)键连接;酵母β-D-葡聚糖硫酸酯化学通式为(C6H10O5)20·9SO3·20H2O,硫酸基团取代位置在糖环的C-6上。此外,本研究还采用激光光散射(MALLS)技术结合YFY和KP蠕虫模型的方法进行研究。判定酵母β-D-葡聚糖硫酸酯溶液构象为一种介于柔性链和刚性链之间的半刚性链构象,并得到其分子层面的构象参数:ML = 646 nm-1,q = 5.1 nm,d = 0.99 nm,C∞= 16.33。最后通过动物试验,证实酵母β-D-葡聚糖及其硫酸酯具有增强免疫功效,其中新方法制备酵母β-D-葡聚糖对Con A诱导小鼠淋巴细转化率具有极显著性差异(P≤0.01),对小鼠NK细胞活性具有显著性差异(P≤0.05);酸碱法制备酵母β-D-葡聚糖对Con A诱导小鼠淋巴细转化率和小鼠NK细胞活性具有显著性差异(P≤0.05);而经超声处理和硫酸酯化之后的酵母β-D-葡聚糖衍生物对Con A诱导小鼠淋巴细转化率、小鼠血清中总补体溶血活性(CH50)和小鼠NK细胞活性均具有极显著性差异(P≤0.01)。
其他文献
目的:研究胃肠道富集Kruppel样因子(KLF4)在胃癌组织中的表达及其与胃癌患者临床病理参数间的关系,探讨其在胃癌发生发展中的作用及其与患者行胃癌根治性术后的预后的关系。方
当今世界,节能已经是人所共识。而建筑作为关系国计民生的重要行业,其巨大的能耗也一直被各国所重视。既有建筑节能改造作为建筑节能工作的重要组成部分,在我国也已开展多年
通过一例左房粘液瘤患者的护理,了解左房粘液瘤患者术前、术后的护理重点,以及该疾病常见的并发症。
【背景】肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)是最常见恶性肿瘤之一,它的发生发展是一个多基因改变,多步骤不断累积的复杂过程。遗传因素在这个过程中起到重要作用。神经调
在高考复习中,概率问题无疑是教学中的一个难点,其思维方法较为独特灵活,一些学生在学习很容易出现"一听就懂,一过就忘,一做就错"的不良情况.……
中国茶文化拥有悠久的历史,经历4700多年的中国茶文化,已经形成了较为完善的文化产业系统,并在中国文化历史资源的开发利用方面发挥着不可忽视的作用。本文结合茶文化产业对
时代的变迁、科学技术的发展、社会竞争的压力,都给当代的教育工作者提出了严峻的考验。英语作为一门可以打开国界,进行各国贸易、文化交流的语言工具,越来越成为新时代人们
随着磁共振式无线电能传输技术的研究与推广应用,基于该技术系统工作时电磁环境安全性的研究极为重要。首先阐述了磁共振式无线电能传输技术的发展历史和应用情况,在此基础上介
陈省身,南开数学研究所创始人。他是美国数学研究所(加州伯克利)首任所长,美国科学院院士,英国皇家学会国外会员,中国科学院外籍院士。他以几何学和拓扑学的杰出工作闻名世界,曾获美
胃癌是一种最常见的人类恶性肿瘤,居全球癌症死亡率的第二大原因,预后较差,在我国,5年期胃癌的生存率低于20%-25%。早期胃癌可以通过手术切除,辅以放化疗治疗,极大提高患者的5年生