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当前,成花机理已成为植物发育生物学的研究热点之一。CFL是从黄瓜中克隆得到的LFY同源基因,运用基因工程原理将CFL基因异源导入大岩桐,期望获得提早开花的转基因新品种,为控制重要的粮食作物和名贵花卉的开花时间提供实验依据,国内外还不多见。植物花器官发生和花形态多样性的遗传机理和进化规律都可能与MADS盒基因的结构、表达以及功能进化相关。目前,绝大多数MADS盒基因的功能都是采用突变体发现的。采用异源转基因研究MADS-box基因功能的报道尚少。 本课题将CFL和两个MADS-box基因通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105介导分别转化大岩桐,获得以下结果: 1.构建了多个CFL基因表达载体(组成型pBI-cfl、pCA-cfl;诱导型pER-cfl)。并将CFL基因异源导入大岩桐。①利用pBluscriptSKⅡ克隆载体上的SmaⅠ和SacⅠ酶切位点,PCR法扩增CFL基因片段,并在两端加上相应酶切位点,将CFL置于CaMV 35S启动子控制之下,成功构建表达载体pBI-cfl(切除了GUS报告基因)。②利用pBluscriptSKⅡ载体上的SalⅠ和SacⅠ酶切位点,将CFL基因片段克隆到另一组成型表达载体pCAMBIA13011上,构建了带GUS报告基因的表达载体pCA-cfl。③利用pBluscriptSKⅡ载体上的Apa Ⅰ和Spe Ⅰ酶切位点将CFL基因片段克隆到诱导型表达载体pER-8上,构建了带有GUS报告基因的诱导型表达载体pER-cfl。 通过根癌农杆菌EHA105介导法,将构建好的表达载体导入大岩桐中,经两轮抗性筛选,得到再生植株,通过PCR检测、DNA点杂交、PCR-Southern和Southern杂交,证明外源基因CFL已经整合到植株基因组中,而且拷贝数较低,为单拷贝。部分转基因植株通过室外栽培目前已经开花。 2.采用RACE技术,从早竹(Phyllostachys praecox)中克隆了两个MADS-box基因(PPMADS1、PPMADS2),各自构建了组成型和诱导型表达载体,并以农杆菌介导法将这两个基因异源导入大岩桐。转基因植株目前已移入室外栽培,有待进一步基因功能分析。 3.改变农杆菌介导法的一些参数,通过GUS瞬时检测对转化效率进行比较,结