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目的:1.探究人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirous,HCMV)感染人星形胶质细胞(Astrocytes,AS)即刻早期蛋白IE72表达变化。2.通过检测染料木黄酮(Genistein,Gen)抑制HCMV感染AS引起的即刻早期蛋白IE72及其m RNA的表达变化,以此探讨Gen对HCMV感染AS的影响。再检测IE72基因启动子区域(major immediate early promoter,MIEP)组蛋白乙酰化水平,进一步探讨Genistein抑制人星形胶质细胞HCMV感染的分子生物学机制。方法:1.纯化新取材的原代AS,免疫荧光技术(Immunofluorescence technique)标记星形胶质细胞的标志性蛋白——胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)。2.MTT检测实验组和对照组细胞活性。3.分别用Real-time PCR和Western blot检测IE72m RNA和蛋白的表达情况,实验分为HCMV组、Gen组、用含40μM Gen的2%DMEM/F12培养液预处理细胞4h后,以MIO=5的HCMV感染AS组(Gen+HCMV组)、细胞培养至基本融合后更换含2%FBS的D/F12维持培养,以MIO=5的HCMV感染AS,置恒温培养箱中孵育4 h后弃去培养液,更换含40μM Gen的2%DMEM/F12培养液组(HCMV+Gen组)和对照组。4.染色质免疫共沉淀法(Ch IP)检测HCMV组、Gen+HCMV组、HCMV+Gen组和对照组的主要即刻早期基因启动子区域(MIEP)组蛋白H3乙酰化水平。结果:1.Cy3标记的抗GFAP显示95%以上细胞为AS。2.MTT显示:40μM Gen+HCMV组24 h、48 h、72 h的吸光值显著高于HCMV组(P<0.05);病毒形态感染48h后,HCMV组细胞有明显的细胞病变效应(CPE),40μMGen+HCMV组细胞状态良好。3.RT-q PCR结果显示:感染24h、48h、72 h和96h时HCMV+Gen组及Gen+HCMV组IE72的m RNA表达明显低于HCMV组(P<0.05)。4.Western blot结果显示:感染HCMV+Gen组及Gen+HCMV组细胞的IE72蛋白表达都明显低于HCMV组(P<0.05)。5.Ch IP法提取MIEP组蛋白H3乙酰化的结果显示:Gen+HCMV组和HCMV+Gen组的水平明显低于HCMV组。结论:1.HCMV能够感染原代星形胶质细胞,是其容许细胞。2.适当浓度的Gen能抑制HCMV感染AS后IE72基因和蛋白表达。3.Gen抑制HCMV IE72基因和蛋白表达可能是通过Gen抑制MIEP组蛋白H3乙酰化来实现的。