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第一部分SOX7和SOX17基因启动子异常甲基化抑制白血病细胞株中SOX7和SOX17基因表达目的：在急性髓系白血病细胞株THP-1和骨髓增生异常综合征(MDS)转白细胞株SKM-1中,探讨去甲基化药物5-氮杂-2-脱氧胞苷(DAC)处理对SOX7和SOX17基因表达和细胞增殖的影响；检测SOX7和SOX17基因在细胞株中甲基化状态,同时对甲基化PCR (MSP)技术的正确性进行验证。方法：使用2、4和8μmol/LDAC处理细胞株(THP-1和SKM-1),在24h、48h和96h三个时间点观察SOX7和SOX17基因表达变化。使用CCK-8法检测4μmol/L DAC药物浓度对细胞增殖的影响。采用MSP的方法检测细胞株SOX7和SOX17DNA甲基化状态,并用亚硫酸盐测序验证MSP技术的结果。结果：SOX7和SOX17基因在THP-1和SKM-1细胞株中均有表达,使用DAC处理后SOX7和SOX17基因mRNA表达均被上调(P<0.05),并有浓度梯度和时间梯度效应,且THP-1细胞株SOX7和SOX17基因表达上调幅度较SKM-1高。4μmol/L DAC处理细胞后,发现细胞增殖减慢(P<0.05),THP-1较SKM-1对药物反应敏感。MSP结果发现,SOX7和SOX17基因甲基化DNA存在于THP-1和SKM-1细胞株中,亚硫酸盐测序验证结果与MSP结果一致。结论：THP-1和SKM-1细胞株中存在SOX7和SOX17基因的异常甲基化,基因表达水平在DAC处理后上调。亚硫酸盐测验验证了MSP试验的正确性,表明可以使用该方法进行大批量临床标本SOX7和SOX17基因甲基化检测。第二部分SOX7和SOX17基因异常甲基化在骨髓增生异常综合征患者中的预后价值目的：研究SOX7和SOX17基因异常甲基化在骨髓增生异常综合征(MDS)患者中的预后价值。方法：采用前瞻性方法收集上海市中美联合白血病协作组2003年6月至2009年4月确诊的MDS患者,并进行随访,收集临床数据,了解其转归,分析生存率和预后影响因素。采用甲基化特异性PCR的方法检测了确诊的167例MDS患者骨髓标本DNA中SOX7和SOX17基因甲基化状态,评价其预后价值。以死亡或末次随访时间(2009年4月30日)为随访终点。以总体生存时间(overall survival, OS)和转白率作为反映MDS预后的指标。Kaplan-Meier方法计算各个亚组的OS,单因素预后分析采用log-rank检验。X2检验和确切概率法估计转白率。将单因素分析中有意义的因素纳入COX回归模型进行多因素分析,以明确影响OS的独立预后因素。结果：在MDS患者中均存在SOX7和SOX17基因异常甲基化,甲基化阳性率分别为58.1%和58.5%,有69(41.3%)例患者同时存在两个基因的甲基化。SOX7和SOX17基因甲基化率在不同WHO临床分型中有明显差异,高危组MDS甲基化阳性率高(P=0.011,P=0.002)。SOX7和SOX17基因甲基化阳性率随着IPSS积分的增加而增加(P<0.001,P=0.009)。生存分析提示SOX7和SOX17甲基化阳性患者的中位生存时间分别为16.50个月和18.50个月,相比非甲基化组的31.80个月和26.93个月明显缩短,具有统计学意义(P=0.012,P=0.021)。单独SOX7和SOX17基因甲基化不能预测转白率。但同时有SOX7和SOX17基因甲基化OS为13.23个月,明显短于一个基因甲基化阳性或两个基因甲基化均阴性的患者28.37个月(P=0.002),二个基因甲基化阳性患者的转白率为27.54%,高于一个基因甲基化阳性或均阴性患者14.74%(P=0.012)。结论：MDS患者中存在SOX7和SOX17基因甲基化改变,并且在MDS患者预后中有重要意义。SOX7和SOX17基因甲基化患者具有较短的生存时间,同时出现甲基化时具有更短的生存时间和更高的转白率,提示SOX7和SOX17在MDS患者的发病和发展中起了重要的作用。