论文部分内容阅读
目的通过细胞生物学技术、分子生物学技术以及生物信息学分析方法,研究Faslg在大鼠坐骨神经损伤修复过程中的分子作用机制。Wallerian溃变是周围神经损伤后远侧端发生的一种顺行性退变,在之前的研究结果表明,Faslg在Wallerian溃变过程中起着重要的调控作用。本课题旨在通过体内与体外研究Faslg在大鼠坐骨神经横断损伤后,Wallerian过程当中对雪旺细胞(SCs)增殖、迁移、凋亡等功能的影响,同时探索Faslg调控坐骨神经损伤与修复过程当中的分子作用机制,为周围神经损伤与修复以及功能重建提供更多的理论基础。方法1.建立大鼠坐骨神经横断损伤模型;2.IHC、ICC分析Faslg的表达定位;3.将Faslg si RNA和质粒转染到体外培养的SCs中;4.实时荧光定量PCR分析;5.蛋白免疫印迹分析;6.Ed U增殖、Transwell迁移和Annexin V凋亡分析;7.体内功能试验,进行体内Faslg功能验证;8.TUNEL检测组织凋亡;9.使用SPSS统计学分析软件进行单因素方差分析,试验中所有数据均用标准差SD和均数(?)表示((?)±SD),且认为p<0.05具有统计学意义。结果1.ICC和IHC结果显示Faslg和S100B共定位于SCs中;2.大鼠坐骨神经横断损伤后,Faslg在损伤修复过程中的表达量显著升高;3.Faslg si RNA干扰后SCs的增殖和迁移增加,但凋亡减少;4.Faslg质粒过表达后SCs的增殖和迁移减少,但凋亡增加;5.相关基因如:bcl-2、bax、b FGF、Nf2在Faslg si RNA干扰和质粒过表达SCs之后的表达发生变化;6.Faslg si RNA干扰和质粒过表达SCs后,相关通路蛋白如c-fos、p-c-jun/c-jun、N-Ras蛋白表达水平上没有差异,而在β-catenin、p-ERK/ERK、p-AKT/AKT、NF-κB、Caspase-3通路上发生明显变化。7.Faslg si RNA干扰和质粒过表达大鼠损伤的坐骨神经后,相关通路蛋白如p-ERK/ERK、c-fos、p-c-jun/c-jun、NF-κB、N-Ras蛋白表达水平上出现不稳定性差异性变化,而在β-catenin、p-AKT/AKT、Caspase-3通路上发生明显的稳定性变化。8.体内si RNA干扰Faslg的表达后,坐骨神经损伤修复过程中细胞凋亡数量减少,但过表达后细胞凋亡数量并未发生差异性变化。结论1.Faslg与S100B共定位,即Faslg在SCs的细胞膜上表达;2.Faslg可以抑制体外培养的SCs的增殖和迁移,同时促进SCs的凋亡;3.Faslg可能通过β-catenin、p-ERK/ERK、p-AKT/AKT、NF-κB、Caspase-3这些蛋白通路来调控SCs的功能。4.在体内,Faslg可能通过β-catenin、NF-κB、Caspase-3这些蛋白通路来调控大鼠坐骨神经损伤后再生与修复。5.大鼠坐骨神经损伤修复过程中Faslg在细胞凋亡方面发挥了一定作用。