研究背景与目的早发性卵巢功能不全（premature ovarian insufficiency,POI）是一种较为常见的妇科生殖内分泌疾病,严重威胁着女性的生殖健康和生活质量。POI病因包括:遗传、免疫、放化疗或卵巢手术等医源性因素、以及环境因素等。其中,免疫因素是POI是较为常见的病因。机体免疫失调导致自身抗体攻击卵巢,产生局部炎性细胞浸润,损伤卵巢功能。但具体发病机制仍不明确,因此目前缺乏有效治疗方法,临床上以激素补充等对症治疗为主,达不到满意的疗效。近年来,间充质干细胞（MSCs）因其来源广泛、具有多向分化能力及旁分泌作用,在各类疾病治疗中受到广泛关注展现出广泛的应用前景。目前已有使用各类MSCs治疗特发性或化疗性POI的动物以及临床研究,但尚无骨髓间充质干细胞（BMSCs）修复免疫性POI的相关报道。本研究进行体内、体外实验,明确BMSCs对免疫性POI的修复效应及可能机制,为BMSCs治疗免疫性POI提供实验依据。研究方法第一章:体外建模。在卵巢颗粒细胞培养基中加入不同浓度IFN-γ（0、10、20、50、100 ng/mL）作用24 h,通过检测颗粒细胞形态、增殖、凋亡情况,确定合适作用条件。检测培养基中雌激素、细胞因子水平,评估该作用条件下激素合成情况、免疫损伤程度,完成免疫性POI体外模型的建立。第二章:从TLR4识别途径启动、细胞焦亡通路激活角度,探讨颗粒细胞发生免疫损伤的可能机制。第三章:体外修复作用。利用transwell培养皿将BMSCs与IFN-γ诱导免疫损伤的颗粒细胞进行非直接接触式共培养,观察BMSCs对颗粒细胞的增殖、凋亡、激素合成能力、焦亡发生的影响,从而评估BMSCs对IFN-γ诱导的颗粒细胞免疫损伤的修复作用。第四章:体内修复作用。在自身免疫性POI小鼠模型中卵巢原位注射BMSCs,对小鼠进行动情周期检测、血清激素检测、卵巢H＆E染色、各级卵泡计数、TUNEL检测,评估BMSCs对免疫性POI小鼠卵巢的修复作用。结果1.使用IFN-γ（50 ng/mL作用24 h）建立卵巢颗粒细胞免疫损伤模型;2.在IFN-γ诱导的颗粒细胞免疫损伤模型中,TLR4识别及经典焦亡通路被激活;3.BMSCs体外共培养能够促进颗粒细胞增殖、抑制凋亡、改善激素合成能力、减少焦亡发生;4.BMSCs体内使免疫性POI小鼠动情周期紊乱情况改善,血清雌二醇升高、卵泡刺激素下降,卵巢形态改善,原始卵泡、初级卵泡数量增加,闭锁卵泡数量减少,卵巢颗粒细胞凋亡减少。结论本文使用IFN-γ构建卵巢颗粒细胞免疫损伤模型,该模型能够一定程度上模拟免疫性POI的疾病特征。在体外及体内实验中,BMSCs对免疫性POI均存在一定的修复作用。