目的：T细胞淋巴瘤(T-cell lymphoma)是一种来源于T淋巴细胞的恶性克隆增殖性疾病，是我国高发的非霍奇金淋巴瘤类型，约占所有非霍奇金淋巴瘤的25％左右。目前，国内外尚缺乏理想的治疗方案，晚期T细胞淋巴瘤常规化疗效果差，因而急需寻找有效的抗癌药物及其联合治疗方案以提高T细胞淋巴瘤的疗效并改善患者预后。　　 硼替佐米是一种蛋白酶体抑制剂，通过影响多种细胞周期调控蛋白及NFκB活性，发挥抗肿瘤作用。淋巴瘤细胞中也普遍存在NFκB的组成高表达，FDA已经正式批准硼替佐米用于治疗多发性骨髓瘤。基础研究表明硼替佐米对淋巴瘤亦具有抗肿瘤作用，在惰性淋巴瘤和套细胞淋巴瘤的治疗上获得了满意的效果，而T细胞淋巴瘤的相关研究，包括基础和临床报告较少。目前，硼替佐米对淋巴瘤的作用机制尚未完全明确。　　 本课题前期研究已证实淋巴瘤患者及其细胞系中存在酪氨酸磷酸酶-1(SHP-1)基因的表达减低或缺如，并与其启动子甲基化有关[26]，5-氮杂胞苷(5-aza-CdR)能诱导淋巴瘤细胞系T2细胞及原代B细胞淋巴瘤细胞中SHP-1基因重新表达或表达升高，从而抑制肿瘤细胞增殖。　　 目前有关硼替佐米对Jurkat细胞增殖的研究报道尚少。为进一步明确硼替佐米抑制淋巴瘤细胞增殖及促凋亡的确切机制，本实验拟采用硼替佐米作用于人类T细胞淋巴瘤Jurkat细胞，观察硼替佐米对T细胞淋巴瘤细胞增殖抑制、诱导凋亡作用，阐述硼替佐米对5杂氮胞苷去除Jurkat细胞甲基化作用的影响及可能机制。为T细胞淋巴瘤的治疗提供理论依据。　　 方法：　　 1、MTT法检测：不同浓度的硼替佐米和5杂氮胞苷单药及二者联合应用对Jurkat淋巴瘤细胞增殖的影响；　　 2、Wright-Giemsa染色及流式细胞分析法：检测不同浓度的硼替佐米和5杂氮胞苷单药及二者联合应用对Jurkat淋巴瘤细胞凋亡的影响；　　 3、RT-PCR检测：各组Jurkat细胞DNMTs和SHP-1mRNA表达变化；　　 4、统计学处理。　　 结果：　　 1、硼替佐米对Jurkat细胞增殖和凋亡的影响　　 不同浓度的硼替佐米作用于Jurkat细胞24h、48h、72h后，发现硼替佐米抑制Jurkat细胞增殖，并呈时间、剂量依赖性(table-2，Fig.7，Fig．6，Fig.8)。24h、48h和72h细胞增殖抑制50％的药物浓度(IC50)分别是140.62nmol/L、39.72 nmol/L和28.96 nmol/L(table-8)。　　 2、硼替佐米30nmol/L处理　　 48h，形态学观察发现Jurkat细胞出现典型的凋亡，表现为胞膜完整，核固缩或核碎裂，可见凋亡小体。流式细胞分析显示，30nmol/L硼替佐米处理Jurkat细胞24h、48h、72h后，细胞凋亡率分别为15.96％，36.05％，45.16％(Fig.6，table-4)。　　 3、5杂氮胞苷抑制Jurkat细胞增殖并促进其凋亡　　 随着5杂氮胞苷浓度的增加和药物作用时间的延长，Jurkat细胞增殖受抑，凋亡率增加(table4，table1，Fig.，1)。　　 4、硼替佐米能增强5杂氮胞苷对Jurkat细胞的促凋亡作用　　 选择以剂量远低于72h的IC50的硼替佐米(10nmol/L)和不同浓度的5杂氮胞苷联合作用Jurkat细胞，三种联合用药任意时间段的细胞生长抑制率与单药组比较有统计学差异。说明硼替佐米和5杂氮胞苷联用在Jurkat细胞上时，可产生增强效应。　　 5、5杂氮胞苷和硼替佐米对SHP-1、DNMT1和DNMT3A基因表达的影响　　 RT-PCR结果显示，3μmol/L的5杂氮胞苷作用于Jurkat细胞24h～72h同对照组相比，DNMTsmRNA平均表达水平逐渐降低，分别为(DNMTl:0.52、0.5、0.45(Fig.2);DNMT3A:0.79、0.66、0.45)。SHP-1基因平均表达水平在3μmol/L5杂氮胞苷处理随时间延长逐渐升高(24h：.055、48h：0.79、72h：1.37)。不同浓度的5杂氮胞苷作用Jurkat细胞48h，DNMTs基因表达水平随着5杂氮胞苷浓度的增加而逐渐下降。　　 硼替佐米作用于Jurkat细胞，各组细胞的甲基化转移酶DNMT1和DNMT3A mRNA表达水平相比较无统计学差异，SHP-1 mRNA平均表达水平升高。　　 6、硼替佐米增强5杂氮胞苷对Jurkat细胞的去甲基化作用　　 RT-PCR结果显示，不同浓度的5杂氮胞苷和10nmol/L硼替佐米两药联合作用于Jurkat细胞24～72h后，Jurkat细胞甲基化转移酶DNMT1和DNMT3A mRNA随着时间的延长表达减少，较单药作用时减少更明显；SHP-1基因表达增加，较单药作用时增加更明显；与5杂氮胞苷单药作用时相比均有统计学差异。　　 结论：　　 1、硼替佐米以时间、剂量依赖的方式抑制Jurkat淋巴瘤细胞增殖，促进其凋亡。　　 2、5杂氮胞苷抑制Jurkat淋巴瘤细胞增殖，并促进Jurkat细胞凋亡，呈时间和剂量依赖性，下调甲基化转移酶DNMT1和DNMT3AmRNA表达，使SHP-1基因表达升高，提示5杂氮胞苷抑制Jurkat细胞增殖可能与其去甲基化诱导凋亡有关。　　 3、硼替佐米能促进5杂氮胞苷的诱导凋亡作用，增强5杂氮胞苷对Jurkat淋巴瘤细胞的去甲基化作用，二者联合能增强Jurkat细胞对5杂氮胞苷的敏感性，具体机制待研究。