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为了明确龙眼果实的功能性物质,本论文研究了龙眼果实的化学成分及其主要相关生物活性。对龙眼果皮、果肉和果核以95%工业酒精进行提取,用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇等不同极性的有机溶剂分部,通过硅胶柱层析、凝胶柱层析、聚酰胺柱层析、反相柱层析等进行分离。所得单体化合物的结构采用核磁共振谱、质谱和紫外光谱等光谱解析方法确定。采用清除DPPH自由基活性法和清除超氧阴离子活性法评价化合物的抗氧化活性,采用MTT法评价化合物的癌细胞毒。结果如下:
从龙眼果皮95%乙醇提取物中分离得到13个化合物。分别鉴定为木栓酮(A1)、木栓醇(A2)、(24R)-豆甾-4-烯-3-酮(A3)、β-谷甾醇(A4)、呋喃丙烯酸(A5)、异莨菪亭(A6)、β-胡萝卜甙(A7)、没食子酸(A8)、柯里拉京(A9)、对羟基苯甲酸庚酯(A10)、没食子酸甲酯(A11)、4.O-α-L-鼠李糖基-鞣花酸(A12)、鞣花酸(A13)。
从鲜龙眼果肉的95%乙醇提取物中分离得到9个化合物。分别鉴定为β-谷甾醇(A4)、二十四碳酸(B1)、7,8-二甲基咯嗪(B2)、(2S,3S,4R,10E)-2-[(2R)-2-羟基二十四碳酰胺]-10-十八碳烯.1,3,4-三醇(B3)、尿嘧啶(B4)、丁二酸(B5)、β-胡萝卜甙(A7)、腺苷(B6)和甘露醇(B7)。
从龙眼果核的95%乙醇提取物中分离得到31个化合物。分别鉴定为蜂蜜曲菌素(D1)、β-谷甾醇(A4)、苯乙醇(D2)、2-甲基-1,10-十一烷二醇(D3)、2-乙酰基-N-[2-(4-丙炔基)-丁内酯基]吡咯(D4)、(24R)-6β-羟基-24-乙基-胆固醇-4-烯-3-酮(D5)、齐墩果酸(D6)、(-)-(3R,4S)-4-羟基蜂蜜曲菌素(D7)、异莨菪亭(A6)、异嗪皮啶(D8)、松脂醇(D9)、(-).(3R,4R)-4-羟基蜂蜜曲菌素(D10)、(-)-(3R)-5-羟基蜂蜜曲菌素(D11)、芹菜素(D12)、烟酸(D13)、对羟基苯甲酸(D14)、没食子酸乙酯(D15)、木犀草素(D16)、β-胡萝卜甙(A7)、没食子酸(A8)、1-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)-(2S,3S,4R,8E/Z)-2-[2’-羟基二十四酰胺]-8-十八烯-1,3,4-三醇(D17)、I-O-没食子酰基-β-D-葡萄吡喃糖(D18)、短叶苏木酚酸甲酯(D19)、柯里拉京(A9)、短叶苏木酚(D20)、鼠李糖基鞣花酸(A12)、鞣花酸(A13)、D-I-O-甲基-肌-肌醇(D21)、尿嘧啶(B4)、腺嘌呤核苷(B6)、Rel-(3S,4S,5S)-3-[(2R)-2-羟基二十酰胺]-4-羟基-5-[(4Z)-十四烷-4-烯]-2,3,4,5-四氢呋喃和Rel-(3S,4S,5S)-3-[(2R)-2-羟基二十四酰胺]-4-羟基-5-[(4Z)-十四烷-4-烯]-2,3,4,5-四氢呋喃(D22)。其中D3和D4是新化合物。
鉴定结果显示龙眼果实的三个部分含有一些相同的成分,具体是β-谷甾醇和β-胡萝卜甙为三个部分所共有,不过这两个成分也为大部分植物材料所共有,异莨菪亭、没食子酸、柯里拉京、鼠李糖基鞣花酸和鞣花酸为果皮和果核共有,尿嘧啶和腺苷为果核和果肉所共有。
在DPPH自由基清除活性评价中8个可水解单宁的SC50值是在0.80-5.91μg/ml范围,活性顺序是没食子酸>没食子酸乙酯>短叶苏木酚酸甲酯>柯里拉京>鞣花酸>短叶苏木酚>1-O-没食子酰基-β-D-葡萄吡喃糖>鼠李糖基鞣花酸,活性顺序前4个化合物显示了比维生素C(SC50=2.13μg/ml)更好的清除活性(SC50=0.80-2.01μg/ml);在超氧阴离子清除活性评价中这8个化合物的SC50在1.04μg/ml和7.03μg/ml之间,活性顺序与DPPH自由基清除活性相似。在两个活性评价中都有很好的量效关系,构效关系明显即是分子中没食子酰基片段所占比例大活性就强。
另外6个酚类化合物异莨菪亭、异嗪皮啶、(-)-(3R,4R)-4-羟基蜂蜜曲菌素、芹菜素、(-)-(3R)-5-羟基蜂蜜曲菌素和木犀草素具有明显的DPPH自由基清除活性,不过与维生素C(SC50=2.13μg/ml)相当的只有(-)-(3R)-5-羟基蜂蜜曲菌素(SC50=2.43μg/ml)和木犀草素(SC50=2.82μg/ml)。都有明显的量效关系和构效关系,活性强弱主要与是否具有邻位或对位酚羟基及其数量相关。
在肺癌LAC细胞和A549细胞、肝癌耐药株细胞HepG2/Dox和HepG2毒性测定中,新化合物2-乙酰基-N-[2’-(4’-丙炔基)-丁内酯基]吡咯(11.55μg/mL)对四种癌细胞均有一定的细胞毒性其中对HepG2抑制率最大46.39%;异嗪皮啶(11.1μg/mL)也对这四种癌细胞有一定的细胞毒,最大的是对HepG2抑制率42.10%;异莨菪亭(9.6μg/mL)只对HepG2/Dox和HepG2有细胞毒,而(-)-(3R,4S)-4-羟基蜂蜜曲菌素(9.7μg/mL)只对HepG2有一定细胞毒,总的看这四种化合物都对肝癌HepG2细胞有抑制作用。