去泛素化酶（DUB）在调节多种生物学过程,包括免疫反应,以及将蛋白质靶向蛋白酶体进行降解方面发挥着至关重要的作用。然而,迄今为止,DUB的生物学功能少有研究,特别是在调节巨噬细胞极化方面。在这项研究中,我们将泛素羧基末端水解酶L1（UCHL1）鉴定为巨噬细胞极化的正调节因子。我们证明LPS能刺激诱导巨噬细胞中UCHL1的表达。UCHL1表达不足会降低CD80和CD86的表达,并增加CD206的表达。在UCHL1缺陷型巨噬细胞中,TNF-α、IL-6、iNOS和IL-10的表达下调,而Arg1、Ym1和Fizzl的表达上调。此外,我们观察到UCHL1通过自噬促进p110α的降解,但矛盾的是增加了 AKT的活性,从而促进了巨噬细胞极化为促炎状态。这些结果可能有助于开发治疗炎症性疾病或病原体感染的治疗干预措施。研究方法1.LPS分别刺激小鼠骨髓源巨噬细胞（murine bone marrow derived macrophage,mBMDM）、THP-1（human monocytic leukemia）细胞。实时荧光定量 PCR（real-time quantitative PCR,qPCR-PCR）检测 UCHL1 的 mRNA 表达,蛋白印迹（western blot）检测UCHL1的蛋白表达;2.LPS通过腹腔注射到C57BL/6野生型和UCHL1敲除小鼠中,收集腹腔巨噬细胞（peritoneal macrophages,PMs）,流式细胞术检测 CD80、CD86 和CD206 的水平,qPCR-PCR 检测Tnfα、Il6、Inos、Arg1、Ym1和Fizzl的mRNA表达,ELISA（enzyme-linked immunosorbennt assay）检测外周血中 TNF-α、IL-6和NO的表达,记录小鼠的生存时间;3.LPS和IFNγ共同刺激或IL-4单独刺激C57BL/6野生型和UCHL1敲除小鼠来源的BMDM,流式细胞术检测CD80、CD86和CD206的水平,qPCR-PCR检测Tnfα、Il6、Inos、Il-10、Arg1、Ym1、Fizzl和Mrc1的mRNA 表达,ELISA检测 TNF-α、IL-6、Nitrate 和 IL-10 的表达;4.使用空载体或者UCHL1过表达的病毒处理C57BL/6野生型小鼠来源的BMDM或THP-1,LPS和IFN-γ共同刺激或IL-4单独刺激后,qPCR-PCR检测 Uchl1、Tnfα、Il6、Inos、Il-10、Arg1、Ym1、Fizzl和Mrc1的mRNA 表达;5.LPS和IFNγ共同刺激或IL-4单独刺激C57BL/6野生型和UCHL1敲除小鼠来源的 BMDM,蛋白印迹检测 STAT1、STAT6、AKT、p65、p38、ERK、p70s6k、4ebp1、p85、PDK1、PTEN总蛋白和磷酸化蛋白表达,以及mTORC1、p110α和β-actin的表达;6.DMSO 或 p1 10α 特异性抑制剂 HS-173 处理 BMDM,qPCR-PCR 检测 Tnfα、Il6、Inos、Il-10、Arg1、Ym1和Fizzl的 mRNA 表达;7.CHX预处理C57BL/6野生型和UCHL1敲除小鼠来源的BMDM,后使用LPS和IFNγ共同刺激,蛋白印迹检测p110α降解速度;8.293T 中转染 Flag-p110α 和不同质量的 Myc-Uchl1（WT）、Myc-Uchl1（D30K）、Myc-Uchl1（C90S）,检测 Flag-p110α 的表达;9.LPS 刺激 C57BL/6 野生型小鼠来源的 BMDM,COIP（Co-Immunoprecipitation）检测 UCHL1 和 p110α 的相互作用;293T 中转染 Flag-p110α 和 Myc-Uchl1 质粒,COIP 再次验证 p110α 和 Uchl1 的相互作用;LPS刺激C57BL/6野生型和UCHL1敲除小鼠来源的BMDM,COIP检测p110α泛素化;10.Mg132或BafA1预处理C57BL/6野生型和UCHL1敲除小鼠来源的BMDM,后使用LPS和IFNγ共同刺激,蛋白印迹检测p110α水平;结果1.LPS刺激后,巨噬细胞中UCHL1的表达增加;2.UCHL1促进小鼠体内巨噬细胞往M1分化;3.UCHL1促进小鼠体外巨噬细胞往M1分化;4.UCHL1通过PI3K/AKT信号通路调节巨噬细胞的极化;5.UCHL1通过自噬途径降解p110α。结论UCHL1通过自噬途径降解p110α,激活PI3K/AKT信号通路,增加炎性细胞因子TNF-α、IL-6和Nitrate以及M1表面分子CD80和CD86的表达,降低抑炎标志物Arg1、Ym1和Fizzl以及M2表面分子CD206的表达。