【摘 要】
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该论文首次以豌豆成熟叶片为材料,分别从RNA、蛋白、酶活性等分子水平以及细胞 水平综合研究盐胁迫初期V-ATPase适应性变化的分子机理.将不同浓度盐胁迫自理两天后的豌豆叶片
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该论文首次以豌豆成熟叶片为材料,分别从RNA、蛋白、酶活性等分子水平以及细胞 水平综合研究盐胁迫初期V-ATPase适应性变化的分子机理.将不同浓度盐胁迫自理两天后的豌豆叶片通过差速离心及密度离心分离纯化液泡膜,测定V-ATPase的ATP水解活性,并对A亚基做Western-blot检测蛋白量是否有变化.结果显示,低盐(100mM NaCl)胁迫下,ATP水解 活性几乎没有变化;而在高盐(250mM NaCl)条件下,水解活性增加显著.分离纯化不同浓度盐胁迫两天后的豌豆叶肉细胞原生质体,通过一抗及FITC标记的二抗反应,在激光扫描共聚焦显微镜下观察.发现盐胁迫后,叶肉细胞中V-ATPase的荧光标记密度增加,并且高盐胁迫比低盐胁迫下的荧光标记密度大.提取不同浓度盐胁迫处理一天后的豌豆叶片总RNA,用PCR扩增出c亚基cDNA中的一段保守序列作为探针,进行Northern点杂交.结果显示,豌豆展开 叶片中,c亚基的组成型表达很低.以上实验结构表明,卤胁迫初期豌豆叶片V-ATPase即在 转录、翻译及活性水平表现出应答变化,说明该酶在植物抗盐的适应过程中发挥着重要的调节作用.
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