论文部分内容阅读
[目的]探索μ可片受体对结直肠癌细胞上皮-间质转化和迁移、侵袭的影响。[方法](1)采用免疫组织化学方法,对昆明医科大学第二附属医院胃肠外科患者30例结直肠癌及癌旁组织进行分析。免疫印迹(Western-Blot)用于检测结直肠癌和癌旁组织中μ阿片受体的表达。(2)从中国科学院上海细胞库购买3株结直肠癌细胞SW620,SW480和RKO。通过免疫荧光染色定位结直肠癌细胞系SW620、SW480和RKO中的μ阿片受体。通过免疫印迹筛选具有最高μ阿片受体表达水平的细胞系。将这株细胞分别用以下脂质体进行转染:含有不同的干扰序列(OPRM ShRNA-1、OPRM ShRNA-2、OPRMShRNA-3、OPRM ShRNA-4)的脂质体及阴性对照组脂质体。用免疫印迹法筛选出四条干扰序列中μ阿片受体沉默效率最高的干扰序列并进行后续实验:用免疫印迹法检测脂质体转染前后筛选出的细胞株中的上皮-间充质转化相关指标蛋白:E-cadherin(E-钙粘蛋白)、Vimentin(波形蛋白)、Snail(蜗牛蛋白)、N-cadherin(N-钙粘蛋白)表达水平的改变;通过划痕愈合试验检测脂质体转染前后所选细胞株的迁移能力的变化;Transwell细胞侵袭实验用于检测脂质体转染前后所选细胞系的侵袭能力变化。[结果](1)结直肠癌组织中μ受体的平均染色积分和灰度值均高于结直肠癌旁组织(P<0.05)。(2)μ阿片受体在结直肠癌细胞系SW620、SW480、RKO的细胞核和细胞质中表达,但在细胞膜中不表达。μ阿片受体在结直肠癌细胞SW620中表达水平最高。OPRM ShRNA-1、OPRM ShRNA-3及OPRM ShRNA-4序列沉默结直肠癌细胞株SW620中μ阿片受体表达效率低于OPRM ShRNA-2序列(P<0.05)。与阴性对照组相比,沉默μ阿片受体表达的结直肠癌细胞株SW620的E-cadherin表达水平上升(P<0.05),而Vimentin、Snail及N-cadherin表达水平下降(P<0.05)。转染后的结直肠癌细胞株SW620的迁移能力弱于阴性对照组(P<0.05)。转染后的结直肠癌细胞株SW620的侵袭能力弱于阴性对照(P<0.05)。[结论](1)结直肠癌组织中μ阿片受体的表达水平高于癌旁组织。(2)沉默μ阿片受体的表达不仅抑制结直肠癌细胞的上皮-间质转化,还能抑制结直肠癌细胞的迁移和侵袭能力。