纳米银氧化石墨烯载药凝胶泪道支架对兔泪小管损伤愈合过程的影响

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目的:  观察纳米银氧化石墨烯载药凝胶泪道支架对兔泪小管损伤后愈合过程的影响,并通过检测泪小管组织中的炎症细胞、凋亡及α-SMA的表达情况,为临床上泪道损伤及泪道阻塞性疾病的治疗提供新的理论依据。  方法:  选取健康雄性,体重在2.0-2.5Kg的新西兰大白兔35只。随机取5只作为空白对照(A组),剩余30只兔子泪小管内注入磷霉素钠葡萄糖硬化剂4ml,连续7天,建立兔泪小管损伤模型。A组注入相同量的PBS,将造模成功的大白兔随机分为B、C、D、E、F组,用3D打印法制作泪道支架,并选取长短粗细均匀的泪道支架,B组为水凝胶组、C组纳米银组、D组纳米银-氧化石墨烯组、E组为载药组(纳米银氧化石墨烯左氧氟沙星载药凝胶)、F组为阴性对照组,B、C、D、E四组均于造模后第7天植入相应泪道支架,F组植入后立即取出,泪道支架植入3天后取出其胶壳后重新植入一次,并于实验第0、7、14天做泪液分泌实验及角膜荧光素染色检查,并取泪道组织,进行苏木精-伊红染色(Hematoxyin-eosin staining,HE染色)、TUNEL细胞凋亡检查,评估纳米银氧化石墨烯载药凝胶泪道支架对兔泪小管损伤后泪道组织炎症反应的影响及组织结构的差异性,免疫荧光检测兔泪道组织α-SMA的含量,间接反应载药泪道支架对兔泪小管组织疤痕形成及纤维化程度的影响。  结果:  1.各组泪道支架之间长短、粗细均匀,差异无统计学意义。  2.造模7天后泪液分泌量较空白组减少,角膜荧光素着染阳性,泪道支架植入后泪液分泌量逐渐增加,植入7天后载药组增加显著,泪液分泌量与空白组相当,角膜无明显着染。  3.HE染色结果显示:正常兔泪小管组织分为两层,上皮层和上皮下基质层,上皮层是由复层扁平上皮细胞构成,排列整齐,基质层组织结构排列疏松,正常兔泪小管上皮组织中未见炎症细胞浸润,造模第7天,粘膜上皮皱褶、水肿,结构紊乱,上皮细胞的完整性及连续性破坏,上皮层及基质层中均可见大量炎症细胞浸润,泪道支架植入7天后,载药组上皮组织形态基本恢复,炎症细胞较其他组明显减少。  4.TUNEL实验结果显示:纳米银氧化石墨烯左氧氟沙星载药凝胶泪道支架能够有效抑制兔泪小管损伤组织的细胞凋亡。  5.α-SMA免疫荧光结果显示:正常泪道组织α-SMA无表达,泪小管损伤后α-SMA表达明显上调,植入泪道支架7天后,载药组α-SMA表达较水凝胶、纳米银、纳米银氧化石墨烯及阴性对照组均明显下调。  结论:  1.利用磷霉素钠葡萄糖硬化剂制备泪小管损伤模型成模率高,稳定性好,操作简单,是一种可靠的造模方法。  2.纳米银氧化石墨烯载药凝胶泪道支架具有良好的药物缓释作用,能更好的减轻炎症反应,抑制兔泪小管组织纤维化,在促进泪小管损伤愈合过程中能够潜在的抑制泪道瘢痕性狭窄。  3.纳米银氧化石墨烯载药凝胶泪道支架对眼表刺激性小,不会损伤角膜,是治疗泪道阻塞性疾病的一种安全有效的方法。
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