研究背景胶质母细胞瘤(Glioblastoma multiform,GBM)作为最常见的中枢神经系统恶性肿瘤,是胶质瘤中恶性程度最高的星形细胞系肿瘤(世界卫生组织WHO,IV级,2007),占颅内原发肿瘤的16%,占脑胶质瘤的50%,确诊后的5年生存率小于5%。GBM重要的生物学特征是侵袭性生长,易复发和肿瘤组织内部细胞异质性。目前临床上普遍采用包括肿瘤手术切除、标准剂量放射治疗(60Gy)和替莫唑胺(TMZ)同步化学治疗在内的综合治疗策略,但这种治疗策略仍然有很大的局限性,比如:手术难以切除全部肿瘤、放化疗易出现耐受等,患者的生存期和生存质量没有显著提高。因此,进一步深入探索GBM生长、侵袭机制,以及寻找新的治疗靶点成为目前亟待解决的问题。核受体共激活因子SRC-1(Steriod receptor coactivator-1,又称NcoA1)是p160家族成员之一。SRC-1是核受体(Nuclear receptor,NR)转录活性的重要调节因子,它能与核受体及其它转录因子(如AP-1、Est-2、PEA3、β-catenin、SMAD等)相互作用,激活基因的表达。作为基因表达的重要调节因子,SRC-1参与调节多种机体的正常生理功能,如脑的发育与成熟、血管生成、机体代谢、生殖等;同时SRC-1在多种疾病过程中起重要作用,如肥胖、糖尿病、血脂异常、癌症等。SRC-1可作为核受体共活化因子或独立的因子,通过类固醇依赖性或非依赖性途径促进癌症的发生。目前SRC-1在癌症中的研究主要集中在乳腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、黑色素瘤等癌症方面,但是SRC-1与GBM的关系尚未有相关研究报道。因此我们旨在研究SRC-1在GBM发生发展中的作用及机制,为揭示SRC-1作为治疗GBM的新的靶点提供依据。研究方法(1)利用免疫荧光的方法检测人胶质母细胞瘤组织中SRC-1以及星形胶质细胞标志物GFAP的表达,在激光共聚焦显微镜下观察SRC-1与GFAP的共定位情况。(2)利用免疫组织化学的方法检测人脑胶质瘤芯片中SRC-1的表达,以研究SRC-1表达与临床脑胶质瘤恶性等级相关性。(3)利用慢病毒感染的方式建立稳定敲低或过表达的胶质母细胞瘤细胞系。(4)敲低或过表达SRC-1后,利用MTT法检测细胞增殖情况;利用流式细胞仪检测细胞周期变化情况;给予替莫唑胺及索拉非尼处理,检测SRC-1对药物治疗敏感性的影响;利用划痕实验检测SRC-1对胶质母细胞瘤细胞迁移能力的影响;利用干细胞成球实验检测SRC-1对胶质母细胞瘤干细胞微球形成能力(直径、数目)的影响。(5)通过Western Blot实验,比较SRC-1敲低或过表达后胶质母细胞瘤细胞增值、迁移以及干性相关信号通路蛋白表达情况,进行机制分析。(6)在稳定过表达SRC-1的LN229细胞中瞬时转染FoxM1的siRNA,过表达SRC-1的基础上再瞬时敲低FoxM1,利用Western Blot检测相关蛋白表达变化情况。研究结果(1)SRC-1和GFAP共定位于人胶质母细胞瘤细胞中。(2)SRC-1表达与临床脑胶质瘤恶性等级程度呈正相关。(3)SRC-1表达促进胶质母细胞瘤细胞增值、迁移能力,增强了胶质母细胞瘤的干性,同时敲低SRC-1增强替莫唑胺及索拉非尼药物治疗的敏感性。(4)SRC-1表达上调周期信号通路相关蛋白cyclinD1,CDK4,PCNA表达;增强EMT信号通路中Twist-1,N-cadherin,Vimentin,Snail蛋白表达;促进干性相关标志蛋白CD133,KLF4,SOX2蛋白的表达。(5)SRC-1过表达后,FoxM1蛋白表达增强,再瞬时敲低FoxM1后,下游CDK4和SOX2蛋白表达随之下降,表明SRC-1通过FoxM1调控下游周期和干性相关信号通路。研究结论(1)SRC-1能够加快细胞周期G1/S期转变,进而促进胶质母细胞瘤细胞增殖。(2)敲低SRC-1增强胶质母细胞瘤细胞对化疗药物替莫唑胺和索拉菲尼的敏感性。(3)SRC-1能够加快EMT进程,从而增强胶质母细胞瘤细胞的迁移能力。(4)SRC-1能够上调干性标志蛋白SOX2和KLF4的表达,增强胶质瘤干细胞自我更新能力。(5)SRC-1通过FoxM1调控下游细胞周期和干细胞自我更新相关通路。