目的原发性肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC以下简称肝癌）目前是发病率世界第六位，仅次于胃癌、食道癌的肿瘤相关死亡率世界第三位的恶性肿瘤，在我国高发于东南沿海地区，在我省肝癌死亡率鲁中高于周边地区，原发性肝癌的恶性程度高，进展快，自然生存期短，由于其发病隐匿，患者临床确诊时多处于中晚期，约有80-90%失去手术治疗的机会，除此之外目前临床上针对中晚期的肝癌还可以射频、微波、放射治疗、生物治疗、中医中药以及化学治疗为主。研究结果显示，肝癌即使或得根治性切除，5年内仍有60-70%的患者出现复发，可见化疗的疗效并未达到我们的预期，这已经成为进一步提高肝癌远期疗效的困境。5-氟尿嘧啶（5-FU）作为化疗药物，已经在肝癌术前、术后化疗中广泛应用，通过其在体内转变为5-氟尿嘧啶脱氧核苷酸（5F-dUMP），而抑制脱氧胸苷酸合成酶，阻止脱氧尿苷酸（dUMP）甲基转化为脱氧胸苷酸（dTMP），从而影响DNA的合成。但长期大剂量的使用对骨髓和消化道的毒性较大，其用药有效剂量与中毒剂量相近，限制了它的应用。阿司匹林又名乙酰水杨酸（acetyl salicylic acid，ASA），应用于临床已经有110多年的历史，作为经典的消炎、镇痛及抑制血小板聚集药物，阿司匹林临床上长期用于急慢性风湿病等疾病的治疗。经过多年的研究，发现阿司匹林不仅能显著抑制体外培养原发性肝细胞肝癌（HCC）细胞株生长，对裸鼠HCC原位移植瘤的生长也具有明显的抑制作用。文献报道，阿司匹林对肿瘤生长的作用与其抑制环氧化酶-2（cox-2）有关，并且未造成裸鼠消化道出血和溃疡。本实验采用体外研究的方法，拟就阿司匹林联合5-氟尿嘧啶对肝癌细胞的抑制作用，以期增强5-氟尿嘧啶的疗效，减少用药剂量及时间，从而降低氟尿嘧啶的毒性。为临床联合应用阿司匹林和5-氟尿嘧啶对肝癌的抑制作用提供理论支持。观察阿司匹林联合氟尿嘧啶在抑制细胞增殖，诱导凋亡方面是否有协同作用。探讨探讨阿司匹林联合5-氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡的机制。材料与方法体外培养肝癌细胞，（1）分组情况:分为四大组，分别为:空白对照组、5ug/ml5-氟尿嘧啶组、阿司匹林组又分别以（90、180、360mg/L）三个浓度组、5ug/ml5-氟尿嘧啶+阿司匹林（90、180、360mg/L）即联合用药三个浓度组。（2）观察指标及实验方法:所购买的人肝癌HepG2细胞经体外培养后，再经氟尿嘧啶、阿司匹林单独（90、180、360mg/L）或经5-氟尿嘧啶与阿司匹林联合用药后，用CCK-8检测法测定细胞增殖,再经过培养后应用酶联免疫分析仪在450nm波长下，测定各孔光吸光度值（A）。记录结果,人肝癌HepG2细胞抑制率的计算公式：抑制率=[1-实验组A值/对照组A值]×100%。（3）Annexin V PE/PI荧光双标记法检测肝癌细胞的凋亡。首先用所配置的胰酶从培养瓶底部将肝癌HepG2细胞消化下来，1200转离心5min;各组细胞以每孔lx105细胞接种于培养板内，每组设3个复孔（含阿司匹林组实验组3个复孔/浓度）;当细胞密度达到80%时（大约接种24h左右），每组更换实验所需的培养基;各孔分别加入5ug/ml5-氟尿嘧啶或（90、180、360mg/L）阿司匹林或两种药物药联合应用，处理细胞后继续培养48小时诱导细胞凋亡;用备用不含EDTA的胰酶消化培养板上所需的肝癌细胞；PBS洗涤液洗涤两次，然后在转离心机离心处理5分钟，转速：2000转/分，分别收集实验所需的肝癌细胞8×105;分别吸取一份结合缓冲液500ul加入到细胞悬液中;依次加入所购l0ul的PI和5u1的Annexin V-FITC;经反应后用流式细胞仪检测，记录。（4）Western Blot检测凋亡相关蛋白cox-2，Bcl-2及细胞色素C以及Caspase-9蛋白表达变化。依据蛋白浓度，分别取每组蛋白样品30ug，将其稀释原来浓度的1/2,然后按4:1体积与缓冲液混合，经100℃、l0min水浴处理，冰上冷却、上样；先用70V电压预电泳（30min），然后在积层胶电压70V、分离胶电压100V的条件下行电泳，直至溴酚蓝指示剂迁移到凝胶底部时即可停止电泳；聚丙烯酞胺凝胶电泳停止后，慢慢卸下分离胶，转用电转缓冲液平衡处理30min；经对应的一抗与5%的脱脂奶粉TBS/T溶液以1:1000稀释，后与PVDF膜，在4℃摇床孵育条件下过夜，过后TBS/T洗涤；同法以1:5000稀释标记二抗；显影后检测。（5）统计数据分析：数据以均数标准差表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，结果以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.阿司匹林可单独抑制肝癌细胞的增殖，并在实验范围内与药物浓度有关。2.5-氟尿嘧啶联合阿司匹林对肝癌细胞HepG2的增殖抑制及诱导凋亡作用较单独用药增强。3.阿司匹林可能是通过下调COX-2的表达影响BCL-2的表达，促进细胞色素C释放，激活内源性凋亡途径Caspase-9，从而引起下游Caspase级联反应来增强5-氟尿嘧啶对肝癌细胞的凋亡作用。结论：阿司匹林可抑制肝癌HepG2细胞增殖，诱导肝癌细胞凋亡，可增强5-氟尿嘧啶抑制细胞增值及诱导细胞凋亡作用。其机制可能与阿司匹林下调COX-2及Bcl-2的表达，增加细胞色素C及Caspase-9表达来诱导肝癌HepG2细胞凋亡有关。