目的：本实验建立H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡模型，利用MTT比色实验，流式细胞学技术，PCR法观察不同浓度乌司他丁对心肌细胞存活率，凋亡率，Bcl-2和Bax表达水平的影响。探讨乌司他丁对心肌细胞的保护作用机制。方法：1SD乳鼠心肌细胞的分离培养取出生1³天清洁级健康SD大鼠，吸入乙醚麻醉后，75%酒精浴消毒皮肤，于剑突左旁横切口开胸取出心脏。取心室肌用PBS冲洗5遍，剪成1mm³小块，加入5倍心肌体积的胰酶和EDTA，放入37℃水浴锅振荡消化5min。收集上清液至含胎牛血清的DMEM中终止消化，重复操作6次，200目尼龙网过滤上清液，1000r/min，离心5min。弃上清，加入含胎牛血清DMEM重悬，接种于培养瓶中。差速贴壁1h后，加入0.1mmol/LBrdu纯化心肌细胞，接种于培养板中。48h后换去含Brdu的培养基，以后每48h换液一次，倒置显微镜观察心肌细胞。培养第24h，多数心肌细胞呈梭形或三角形，出现无节律不同步的搏动。培养第48h，心肌细胞呈多角形，出现有节律不同步的搏动。培养第72h伸出突起相互连接交织成网，出现有节律同步搏动，频率多为80-140次/分。2实验分组心肌细胞培养第72h，把有节律同步搏动的心肌细胞随机分为四组。分别为空白对照组（N）、H₂O₂组（H）、乌司他丁1000U/ml组（W Ⅰ）、乌司他丁3000U/ml组（W Ⅱ）。N组：加入等量培养液，孵育相同时间；H组：加入100μmol/L H₂O₂孵育20min，弃上清，加入等量完全培养液孵育6h；WⅠ组：加入100μmol/L H₂O₂孵育20min，弃上清，加入1000U/ml乌司他丁孵育6h；WⅡ组：加入100μmol/L H₂O₂孵育20min，弃上清，加入3000U/ml乌司他丁孵育6h。6h后分别用MTT比色试验检测各组心肌细胞的存活率，流式细胞术检测各组心肌细胞凋亡率，RT-PCR法检测各组心肌细胞Bcl-2蛋白和Bax蛋白mRNA的表达水平。采用SPSS13.0统计学软件进行分析，计量资料以均数±标准差（x|-s）表示，组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。结果：1MTT比色实验检测心肌细胞存活率：与对照组相比，H组、WⅠ组、WII组存活率均下降（P<0.05）；与H组比，WⅠ、WII组存活率上升（P<0.05）；与WⅠ组比，WII组存活率下降（P<0.05）。2心肌细胞Bcl-2蛋白mRNA的表达水平：与对照组相比，H组、WⅠ组、WII组Bcl-2蛋白mRNA表达均减少（P<0.05）；与H组比，WⅠ、WII组Bcl-2蛋白mRNA的表达增加（P<0.05）；与WⅠ组比，WII组Bcl-2蛋白mRNA的表达减少（P<0.05）。3心肌细胞Bax蛋白mRNA的表达水平：与对照组相比，H组、WⅠ组、WII组Bax蛋白mRNA的表达均增加（P<0.05）；与H组比，WⅠ、WII组Bax蛋白mRNA的表达均减少（P<0.05）；与WⅠ组比，WII组Bax蛋白mRNA的表达增加（P<0.05）。4流式细胞术检测心肌细胞凋亡率：与对照组相比，H组、WⅠ组、WII组凋亡率均上升（P<0.05）；与H组比，WⅠ、WII组凋亡率均下降（P<0.05）；与WⅠ组比，WII组凋亡率上升（P<0.05）。结论:乌司他丁抑制H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡,浓度过高保护心肌细胞作用降低，机制可能与其抑制Bax的mRNA表达,促进Bcl-2的mRNA表达有关。